鸭坦布苏病毒病EDⅢ-ELISA方法的建立  

作　　者：陈伟国 申翰钦[1] 王占新[2] 周庆丰[2] 谢青梅[1] 陈峰[1] 

机构地区：[1]华南农业大学动物科学学院,广州510642 [2]广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439

出　　处：《养禽与禽病防治》2016年第8期4-9,共6页Poultry Husbandry and Disease Control

基　　金：广东省科技计划项目(2015A020209137)

摘　　要：为建立鸭坦布苏病毒抗体ELISA检测方法,采用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒ZJSBL01株E蛋白结构域III(EDIII)基因,将其克隆至原核表达载体p ET-28a,转化到BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得了重组EDIII蛋白。利用EDIII蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV Ig G抗体的间接ELISA方法,并对反应条件进行优化。最终确定抗原包被浓度为4μg/m L、血清稀释度为1:40、抗原包被条件为37℃包被4 h、封闭液为含3%BSA的PBST、封闭条件为37℃封闭2 h、酶标二抗稀释度为1:1 000、底物反应时间为15min作为ELISA的最佳反应条件。当检测样品S/P大于0.306判定为阳性。建立的ELISA检测方法特异性强、重复性好,对开展鸭坦布苏病毒抗体检测及血清学调查具有重要意义。

关 键 词：鸭坦布苏病毒 EDIII蛋白 间接ELISA 

分 类 号：S858.32[农业科学—临床兽医学]