淫羊藿苷通过AKT／P53通路抑制S-亚硝基谷胱甘肽诱导的内皮细胞凋亡  

Icariin reduces S-nitrosogultathione induced endothelial cell apoptosis through modulating AKT/P53pathway

作　　者：黄熹[1] 项涛[2] 徐石[6] 陆森[2] 刘辉[3] 张维晨[4] 项鹏辉 许攀峰[5] 

机构地区：[1]浙江大学医学院附属第一医院心电图室,杭州310003 [2]浙江大学医学院附属第一医院肛肠外科,杭州310003 [3]浙江大学医学院附属第一医院血液内科,杭州310003 [4]浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科,杭州310003 [5]浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,杭州310003 [6]香港大学李嘉诚医学院呼吸内科

出　　处：《中华心血管病杂志》2016年第8期707-713,共7页Chinese Journal of Cardiology

基　　金：浙江省医药卫生一般研究计划（2014KYA081）

摘　　要：目的观察淫羊藿苷（ICA）对S－亚硝基谷胱甘肽（GSNO）诱导的内皮细胞凋亡的影响，并探讨其机制。方法内皮细胞株EA.hy926由浙江大学提供，将细胞按整群随机抽样法，分成空白对照组、损伤组（GSNO组）、不同浓度（高、中和低浓度）ICA干预组（ICA组）以及蛋白激酶B（AKT）通路的蛋白酶抑制剂LY294002抑制高、中和低浓度ICA组。空白对照组为EA.hy926细胞于96孔板培养，未予任何干预；GSNO组为EA.hy926细胞于96孔板培养48 h后给予1 mmol/L GSNO处理；高、中和低浓度ICA干预组为EA.hy 926细胞于96孔板培养24 h后分别加入10、1和0.1 μmol/L的ICA预保护24 h，再给予1 mmol/L GSNO处理；LY294002抑制高、中和低浓度ICA组为EA.hy 926细胞于96孔板培养24 h后分别给予高（10 μmol/L）、中（1 μmol/L）和低浓度（0.1 μmol/L）ICA干预的同时加入1 μmol/L LY294002，再作用24 h后给予1 mmol/L GSNO进行干预。噻唑蓝染色（MTT）法测定各组细胞存活率。根据不同试剂盒要求，检测各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）含量、活性氧（ROS）活性和线粒体膜电位。Western blot法检测各组细胞AKT/磷酸化AKT（p－AKT）、人抑癌蛋白53（P53）、细胞色素C（CYC）、内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）/磷酸化eNOS（p－eNOS）以及procaspase－3/caspase－3蛋白表达水平。结果（1）各组EA.hy926细胞存活率：GSNO组细胞存活率明显低于空白对照组（P〈0.01），而高、中和低浓度ICA组均明显高于GSNO组（P均〈0.01）。（2）各组EA.hy926细胞LDH活性：GSNO组的细胞LDH活性明显高于空白对照组[（142.65±5.56） U/L比（50.01±3.42）U/L，P〈0.05]，而高、中和低浓度ICA组则均明显低于GSNO组[分别为（98.02±3.52）、（105.29±6.89）和（117.16±4.27） U/L比（142.65±5.56） U/L，P均〈0.05]，且降低LDH活性的效果具有浓度依赖性。（3）各组EA.hy926细胞MDA含量：Objective To observe the effects of icariin on S-nitrosogultathione （GSNO） induced endothelial cell apoptosis, and to explore the relative mechanisms. Methods EA. hy926 cell line was provided by Zhejiang University and cells were divided into blank control group, GSNO group （ 1 mmol/L GSNO） , icariin （ICA） intervention group （GSNO ± different concentrations （high, medium and low： 10, 1 and 0. 1 μmol/L ICA） and 1 μmol/L LY294002 pretreatment groups （AKT protease pathway inhibitor on top of ICA groups） by cluster random sample method. After 48 hours. EA. hy 926 cell survival was detected by thiazolyl blue tetrazolium bromicle （MTT） method. Lactate dehydrogenase （LDH） activity, malonaldehyde （MDA） content, reactive oxygen species （ROS） level, mitochondrial membrane potential were also measured. The protein expression of protein kinase B （AKT）/phosphorylation protein kinase B （p-AKT）, people tumor-suppressor protein （protein 53, P53 ）, cytochrome C （CYC）, endothelial nitric oxide synthetase （eNOS）/phosphorylation endothelial nitric oxide synthetase （p-eNOS）, procaspase-3/ caspase-3 was detected by Western blot. Results （ 1 ） The cell survival rate was significantly lower in GSNO group than in the blank control group （ P 〈 O. 01 ）, which was significantly higher in the high, medium and low concentration ICA groups than in the GSNO group （all P 〈 0.01 ）. （2） The LDH activity was significantly higher in the GSNO group than in the blank control group （ （ 142. 65 ± 5.56 ） U/L vs. （50. 01 ± 3.42 ） U/L, P 〈 0. 05 ） , which was significantly reduced by high, medium and low concentration ICA （（98.02±3.52）, （105.29±6.89） and （117.16±4.27） U/Lvs. （142.65±5.56） U/L,allP〈 0. 05 ） in a dose-dependent manner. （3） The MDA content was significantly higher in GSNO group than in the blank control group （ （ ll. 14 ±0. 37） nmol/mg vs. （5.21 ±0. 18） nmol/mg, P 〈 0. 05） , which could be redu

关 键 词：内皮细胞 细胞凋亡 淫羊藿苷 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学]