小檗碱对冈田酸诱导HT22细胞损伤的保护作用  

Neuroprotective effect of Berberine on OA-induced HT22 mouse hippocampal neurons injury

作　　者：段文彪[1] 肖春苟[1] 叶茂盛[1] 张霞[2] 蒋威[1] 

机构地区：[1]肇庆医学高等专科学校人体解剖与组织胚胎学教研室,广东肇庆526020 [2]肇庆市肇庆医学高等专科学校病理教研室,广东肇庆526020

出　　处：《解剖学研究》2016年第4期261-268,共8页Anatomy Research

基　　金：广东省医学科研基金项目(A201618);广东省中医药局中医药常规科研项目(201625156);肇庆市科技创新项目(2014E284)号;肇庆市科技创新指导类项目(00188651150605028);肇庆医学高等专科学校博士科研启动基金项目(zgyb15-01);肇庆医学高等专科学校中青年科技基金项目(zgyg16-001)

摘　　要：目的 本实验以冈田酸（OA）损伤的HT22细胞作为氧化应激损伤的体外模型,探讨小檗碱对OA氧化应激损伤作用的影响及其机制。方法 应用CCK-8法检测不同浓度冈田酸（0、20、40、60、80、160 nmol/L）损伤HT22细胞12 h后的细胞活力;不同浓度小檗碱（2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L）预处理HT22细胞12 h后加入OA损伤12 h,应用CCK-8比色法检测细胞的增殖状况;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;应用试剂盒对细胞丙二醛（MDA）和抗氧化酶（SOD-1和GSH-Px）活性的进行测定;2′,7′-dichlorfluorescein-diacetate（DCFH-DA）染色检测HT22细胞内ROS水平;Western blot法检测Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 OA（0-160 nmol/L）处理HT22细胞12 h后,细胞活力分别为（100.00±0.42）%、（91.96±1.18）%、（72.79±1.51）%、（57.89±3.18）%、（41.50±1.58）%、（33.83±1.59）%,细胞活力呈浓度依赖性下降;小檗碱（2.5-20.0μmol/L）预处理细胞12 h后,再给予OA作用12 h,细胞活力由OA单独损伤组（76.48±3.94）%,分别上升至（89.18±3.38）%、（97.06±5.56）%、（94.85±3.16）%、（87.52±4.81）%;小檗碱（5.0、10.0μmol/L）预处理组,减少了MDA的产生,抑制了细胞内ROS的积聚,提高了抗氧化酶（SOD-1和GSH-Px）活性,下调了Cleaved caspase-3蛋白表达。结论 小檗碱可以通过对抗OA诱导的HT22细胞氧化应激损伤和凋亡发挥其神经保护作用。Objective Our objective is to investigate the effect of Berberine （Ber） on Okadaic acid （OA） induced HT22 cell damage and explore the underlying mechanisms. Methods Using CCK-8 assay to detect Cell viability; Obtain morphology of HT22 mouse by inverted microscope; Using assay kits to measure the a.ctivities of MDA content, antioxidant enzyme （SOD, GSH- Px） ; Analyze intracellular ROS by DCF-DA staining; Western blot analyze Cleaved caspase-3. Results After different concentra- tions of OA （0-160 nmol/L） induced on HT22 cell 12 h, the cell viability were （100.00±0.42）%, （91.96± 1.18）%, （72.79± 1.51 ） %, （57.89 ± 3.18 ） %, （41.50 ± 1.58 ） %, （33.83 ± 1.59 ） %, respectively ; After pretreatment with various concentration of Ber （2.5-20.0 μ mol/L） 12 h, 80 nmol/L OA was added to HT22 ceils 12 h. The cell viability from OA alone group 76.48±3.9% increased to （89.18 ± 3.38）%, （97.06±5.56）%, （94.85±3.16）%, （87.52±4.81）%; Pre-treatment with Ber （5.0, 10.0 μmol/L） 12 h prior to OA exposure attenuated the increase of MDA, inhibits the generation of ROS, restored the loss of antioxidant enzyme （SOD-1, GSH-Px） activities, decreased the expression of cleaved caspase-3 expression. Conclusion Our results indicate that Berberine ex erts neuroprotective effect through anti-oxidative stress and anti-apoptoisis.

关 键 词：小檗碱 HT22小鼠海马神经元 氧化应激 凋亡 神经保护 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学]