利用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建TP53基因敲除HeLa细胞系（英文）  

Knockout TP53 of He La Cells by CRISPR/Cas9 Technology

作　　者：董文洁[1] 杨远勤[1] 方先龙 尹晓飞[2] 徐燕妮[2] 王娇娇[1] 褚亮[2] 王如伟 方玲 吴帅[2] 刘新垣[1,2] 

机构地区：[1]浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,杭州310018 [2]中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所,上海200031 [3]浙江康恩贝制药股份有限公司,杭州310018

出　　处：《中国细胞生物学学报》2016年第9期1091-1099,共9页Chinese Journal of Cell Biology

基　　金：supported by the National Natural Science Foundation of China(Grant No.31301064,81372453);Natural Science Foundation of Shanghai(Grant No.13ZR1446300);Shanghai Municipal Science and Technology Commission Fund(Grant No.15431902800)~~

摘　　要：该研究利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9)基因编辑系统构建了TP53(tumor antigen p53)基因敲除He La细胞系。CRISPR/Cas9系统能够精确地切开TP53基因并在双链断裂处插入选择标记(通过与供体质粒进行同源重组获得)。进一步的功能试验表明,TP53基因敲除的He La细胞拥有更强的细胞增殖能力、化疗耐药性以及氧化应激能力,提示He La(TP53–/–)恶性程度增强。所有的数据旨在描述一个简单和有效的方法,即通过CRISPR/Cas9系统来构建基因缺失细胞系,期望在较大程度上帮助研究和阐明基因功能以及细胞机制。We generated TP53 knockout cells via CRISPR/Cas9 system in He La cells. CRISPR/Cas9 system could precisely knockout TP53 gene in He La cells and insert selection markers（as donor template for the recombination repairing） in DSBs（double-strand breaks） site as well. Further functional study revealed that He La（TP53–/–） cells get vigorous growth, resistance to chemotherapy and oxidative stress, implying that He La（TP53–/–） cells become more cancerous. All our data described a simple and efficient approach for gene deletion in cell line via the CRISPR/Cas9 system, largely helped clarifying the functions of gene and analyzing the mechanism of cellular process.

关 键 词：CRISPR/Cas9 TP53 基因敲除 同源重组修复 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]