藁本内酯对重组人热休克蛋白60诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制  

Effects of ligustilide on the extracellular recombinant human heat shock protein 60 induced inflammatory reactions in the THP-1 cells and the related mechanisms

作　　者：高颖[1] 陈蕊[2] 顾宁[3] 何小丽[3] 杨志军[2] 左可可[3] 

机构地区：[1]南京中医药大学博士后流动站,210046 [2]南京中医药大学第一临床医学院中医系 [3]南京中医药大学第三附属医院心内科

出　　处：《中华心血管病杂志》2016年第9期793-798,共6页Chinese Journal of Cardiology

基　　金：国家自然科学基金（81173399）;中国博士后科学基金（2015M571792）;江苏省博士后科研资助项目（1401137C）

摘　　要：目的 探讨藁本内酯（LIG）对重组人热休克蛋白60（HSP60）诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制.方法 THP-1细胞经佛波酯诱导分化为巨噬细胞后,以免疫荧光法筛选出髓样分化因子88（MyD88）的siRNA最佳转染浓度.将巨噬细胞分为6组（n=3）,包括空白对照组（siRNA转染试剂）、模型组（siRNA转染试剂＋HSP60 10 mg/L）、阴性对照组（MyD88阴性对照品＋ HSP60 10 mg/L）、RNAi组（MyD88 siRNA＋ HSP60 10 mg/L）、LIG组（siRNA转染试剂＋HSP6010 mg/L＋ LIG 20 mg/L）和RNAi＋ LIG组（MyD88 siRNA＋ HSP60 10 mg/L＋ LIG 20 mg/L）.采用Western blot法检测巨噬细胞中MyD88及磷酸化核因子-κB （p-NF-κB）的蛋白表达水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量.结果 （1）模型组的MyD88（1.196±0.125比0.341±0.063,P＜0.01）和p-NF-κB（0.817±0.034比0.312 ±0.046,P＜0.01）蛋白相对表达水平均高于空白对照组;RNAi组的MyD88（0.554±0.043）和p-NF-κB （0.538±0.063）蛋白相对表达水平均低于模型组（P均＜0.01）,而高于空白对照组（P均＜0.05）;LIG组MyD88（0.694±0.087）及p-NF-κB（0.669±0.043）蛋白相对表达水平均低于模型组（P＜0.05或0.01）,而高于RNAi组（P均＜0.05）及空白对照组（P均＜0.01）;RNAi＋ LIG组的MyD88（0.409±0.069）和p-NF-κB（0.395±0.046）蛋白相对表达水平均低于模型组（P均＜0.01）及LIG组（P＜0.05或0.01）,与空白对照组比较差异无统计学意义（P均＞0.05）,p-NF-κB蛋白相对表达水平低于RNAi组（P＜0.05）.（2）模型组的TNF-α[（312.24±28.69） ng/L比（5.99±1.03） ng/L,P＜0.01]和IL-6[（233.45±57.77） ng/L比（2.25±0.67） ng/L,P＜0.01]含量均高于空白对照组;RNAi组的TNF-α[（235.66 ±25.12） ng/L]和IL-6[（131.59±13.99） ng/L]含量均低于模型组（P均＜0.01）;LIG组的TNF-α[（258.13 ±44.80） ng/L]和IL-6[（175.9Objective To investigate the effects of ligustilide （LIG） on extracellular recombinant human heat shock protein 60 （HSP60） induced inflammatory reactions in the THP-1 cells and the related mechanisms.Methods THP-1 cells were differentiated to macrophages by incubation with phorbol-12-myristate-13-acetate （PMA）.The immunofluorescence method was used to screen the optimum transfection concentration of MyD88 siRNA.The macrophages were divided into six groups （n =3）,including blank control （siRNA transfection reagent）,model （siRNA transfection reagent ＋ HSP60 10 mg/L）,negative control （MyD88 negative control ＋ HSP60 10 mg/L）,LIG group（siRNA transfection reagent ＋ HSP60 10 mg/L ＋LIG 20 mg/L）,RNA interfering（RNAi） group（MyD88 siRNA ＋ HSP60 10 mg/L） and RNAi ＋ LIG group （MyD88 siRNA ＋ HSP60 10 mg/L ＋ LIG 20 mg/L）.The protein expression level of MyD88 and phosphonuclear factor-κB （p-NF-κB） in macrophages and the level of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-6 （IL-6） in the culture supernatant were assessed by Western blot analyses or ELISA,respectively.Results （1）The protein expression levels of MyD88 （1.196 ± 0.125 vs.0.341 ± 0.063,P ＜ 0.01） and p-NF-κB（0.817 ±0.034 vs.0.312 ±0.046,P ＜0.01） were significantly higher in the model group than those in the blank control group.The protein expression levels of MyD88 （0.554 ± 0.043） and p-NF-κB（0.538 ±0.063） in the RNAi group were significantly lower than those in the model group （all P ＜0.01） but significantly higher than those in the blank control group （all P ＜ 0.05）.The protein expression levels of MyD88（0.694 ±0.087,P ＜0.05） and p-NF-κB（0.669 ±0.043,P ＜0.01）in the LIG group were markedly lower than those in the model group,but higher than those in the RNAi group （P ＜ 0.05） and the blank control group （P ＜ 0.01）.The protein expression levels of MyD88 （0.409 ± 0.069） and p-NF-κB（0.395 ±0.046） in the RNAi ＋

关 键 词：藁本内酯 炎症 热休克蛋白质类 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学]