慢病毒介导的环氧合酶-2核糖核酸干扰对类风湿性关节炎患者滑膜细胞的影响  

Effects of cyclooxygenase-2 short hairpin RNA transfection on synovial cells of rheumatoid arthritis patient leaded by lentivirus

作　　者：张海宁[1] 李晓飞[1] 张钊[1] 杜清峰 冷萍[1] 王英振[1] Zhang Haining Li Xiaofei Zhang Zhao Du Qingfeng Leng Ping Wang Yingzhen(Department of Joint Surgery, the Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266000, Chin Department of Spine and Joint Surgery, the First People＇ s Hospital of Pingyuan County, Pingyuan 253100, China)

机构地区：[1]青岛大学附属医院关节外科,266000 [2]山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科,253100

出　　处：《中华实验外科杂志》2016年第11期2477-2480,共4页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家自然科学基金（81272056）

摘　　要：目的 体外筛选设计并合成的抑制效率最佳的短发夹核糖核酸（shRNA）序列,并观察慢病毒介导的环氧合酶-2（COX-2） shRNA对类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞的影响.方法 首先根据人COX-2 mRNA序列自行设计4对不同的COX-2shRNA序列,然后包装合成分别含有各对序列的慢病毒载体,并将各组慢病毒载体分别转染RA患者滑膜细胞,通过实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）分别检测转染后细胞基因水平及蛋白质水平的变化,从而筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导的COX-2 shRNA基因转染滑膜细胞后,未观察到对细胞生长速度及细胞形态有明显负面影响,转染后COX-2 mRNA表达水平显著下降,从0.83±0.09、0.84±0.06降到0.15 ±0.01、0.15 ±0.01 （P＜0.05）,相应组别的前列腺素E2（PGE2）[从（160.96±0.23） ng/L降到（84.44±1.02） ng/L]、血管内皮生长因子（VEGF）[从（93.10±0.84） ng/L降到（57.35±1.04） ng/L]、白细胞介素（IL）-1β[从（19.69 ±0.57） ng/L降到（10.60±0.53） ng/L]、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）[从（31.52 ±0.33） ng/L降到（14.55 ±0.59） ng/L]表达量显著降低（P＜0.05）.结论 慢病毒介导的RNA干扰可以显著抑制RA患者滑膜细胞COX-2的表达,从而降低炎性因子的表达量.Objective Screen the most effective hort hairpin ribonucleic acids （shRNA）sequence,and observe the effects on synovial cells of rheumatoid arthritis （RA） patients after cyclooxygenase-2 （COX-2） shRNA transfection by lentivirus.Methods Design four pairs of different COX-2 shRNA according to the human COX-2 mRNA （NM_000963.2） sequence,package and transfect four kinds of lentivirus with the COX-2 shRNA into synovial cells of RA patient,screen the best shRNA sequence by examine the level of mRNA and protein expression respectively with real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） and enzyme-linked immuno sorbent assay （ELISA）.Results There is no obvious negative influence on cell growth and cell morphology after COX-2 shRNA gene transfection mediated by lentivirus,COX-2 mRNA expression decreases from 0.83 ± 0.09,0.84 ± 0.06 to 0.15 ± 0.01,0.15 ± 0.01 （P 〈 0.05） and protein expression of phenyl glycidyl ether （PGE） 2 [（160.96 ± 0.23） ng/L to （84.44 ± 1.02） ng/L],vascular endothelial growth factor （VEGF） [（93.10 ±0.84） ng/L to （57.35 ± 1.04） ng/L],interleukine （IL）-1β [（19.69 ± 0.57） ng/L to （10.60 ± 0.53） ng/L],tumor necrosis factor α（TNF-α） [（31.52 ± 0.33） ng/L to （14.55 ±0.59） ng/L] decreased significantly （P 〈 0.05）.Conclusion Lentivirus mediated ribonucleic acid interference （RNAi）can significantly inhibit COX-2 mRNA expression in synovial cells of RA patients,so as to reduce the expression of inflammatory cytokines.

关 键 词：滑膜细胞 RNA干扰 环氧合酶-2 细胞因子 

分 类 号：R593.22[医药卫生—内科学]