H7亚型禽流感病毒HA基因的原核表达及表达产物的反应原性分析  

作　　者：董斌[1] 陈海超[1] 杨伦[1] 耿文学[1] 熊晓妍 孙兴臣 李敏婕[1] 陈闻[1] 蒋家森 许家荣[1,2,4] 

机构地区：[1]南京农业大学,江苏南京210095 [2]南京千里光生物技术有限公司,江苏南京210095 [3]江苏省句容市科兴养殖基地,江苏句容212400 [4]句容市浩源农业科技有限公司,江苏句容212400

出　　处：《江苏农业科学》2016年第10期49-49,50,51,52,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：江苏省句容市科委项目(编号:NY2013029);江苏省镇江市农业科技支撑项目(编号:SBK2014022021);南京农业大学教改项目(编号:2013Y021);南京农业大学动物医学院教育教学改革研究项目;江苏高校优势学科建设工程资助项目

摘　　要：为构建新型H7亚型禽流感HA基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。从NCBI数据库下载H7亚型禽流感HA全基因序列,合成HA基因;定向克隆到原核表达载体p ET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒p ET-32a(+)-HA;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot法鉴定。结果显示,重组质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;重组的HA融合蛋白约为84 ku,大小与预期融合蛋白大小一致;重组HA融合蛋白可以与His标签单克隆抗体特异性结合,与H7阳性血清有较强的反应原性。成功构建了HA基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组HA融合蛋白表达。

关 键 词：H7N9禽流感病毒 HA基因 pET32a(+) 原核表达 反应原性分析 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]