盐单胞菌Fosmid文库构建及群体感应淬灭酶的筛选  

作　　者：薛鹏飞[1,2] 柳鹏福[2] 史吉平[2] 李丽霞[1] 

机构地区：[1]烟台大学生命科学学院,山东烟台264005 [2]中国科学院上海高等研究院绿色化学工程技术研究中心,上海201210

出　　处：《江苏农业科学》2016年第10期88-88,89,90,91,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:41306142)

摘　　要：通过构建盐单胞菌Fosmid基因组文库,以求筛选到群体感应淬灭酶(AHL降解酶)。采用改良的SDSCTAB法提取1株盐单胞菌基因组DNA,经平末端连接、包装和转染后,成功构建盐单胞菌Fosmid基因组文库。该文库库容1 700个克隆,平均插入片段约35 kb,共包含约60 Mb的DNA容量,覆盖该菌基因组10倍以上。然后以加X-gal的MM基本培养基筛选AHL降解酶阳性克隆,对文库进行功能驱动的蓝白斑筛选。通过初筛,筛选到3个Fosmid阳性克隆,证实了所构建的Fosmid基因组文库能够应用于AHL降解酶的活性筛选。同时该Fosmid文库亦可进一步用于其他功能基因的开发。

关 键 词：盐单胞菌 Fosmid基因组文库 蓝白斑筛选 群体感应淬灭酶 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学]