人-鼠嵌合单链抗体的构建及其在大肠杆菌中的高效可溶性表达和发酵条件优化  

Construction of chimeric single-chain antibody efficient soluble expression in Escherichia coli and optimization of fermentation conditions

作　　者：刘萌[1,2,3] 孙杨[1,2,3] 杨艳坤[1,2,3] 白仲虎 

机构地区：[1]江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,无锡214122 [2]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡214122 [3]江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室,无锡214122

出　　处：《生物学杂志》2016年第6期1-6,共6页Journal of Biology

基　　金：国家自然科学基金项目(31570034);863项目(2015AA020802);973项目(2013CB733602);中央高校基本科研业务费专项资助(JUSRP51401A)

摘　　要：从人血清白蛋白HSA免疫小鼠制备的杂交瘤单克隆抗体细胞中提取总RNA,通过反转录得到c DNA,经RT-PCR的方法扩增出单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的DNA编码序列,通过基因重组的方法将鼠源Fab段VH和VL与人源Fab段重链和轻链恒定区进行嵌合,获得人源化嵌合单链抗体(Single-chain Antibody Fragment,sc Fv),将sc Fv克隆到构建的表达载体p BY中导入到宿主菌BL21-trx B(DE3)中进行可溶性表达,在摇瓶水平通过对发酵条件进行优化,胞内可溶性表达量达到1.23 g/L,在此基础上进行反应器放大培养,对关键参数进行优化,sc Fv表达量达到2.49 g/L。通过人源化嵌合抗体的构建表达并完成了小试水平的研究,为进一步开发人源化单链抗体提供了方法和研究基础。Total RNA was extracted from the hybridoma cells which was prepared through human serum albumin immunized mice and reverse transcribed to cDNA by specific primers. Antibody fragments of Vn and VL were amplified by RT-PCR and spliced with CH and CL genes of humanized Fab to construct a human-mouse chimeric single-chain antibody fragment （scFv）. The scFv was cloned into pBY vector and transformed into E. coli BI21-trxB （DE3） ceils for expression. Through the optimization of fermentation conditions, the soluble expression yield of scFv reached 1.23 g/L and 2.49 g/L in flask and 5 L fermenter respectively.

关 键 词：人源化嵌合抗体 SCFV 可溶性表达 酶联免疫吸附 发酵条件优化 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]