BaP诱导细胞恶性转化过程中DNA甲基化水平的变化  

Analysis of DNA methylation during BaP-induced malignant transformation in vitro

作　　者：刘海龙[1,2] 高玮[1] 古盼 邓燕霞[1] 黄新凤[1] 吴德生[1] 刘建军[1] 黄海燕[1] LIU Hailong GAO Wei GU Pan DENG Yanxia HUANG Xinfeng WU Desheng LIU Jianjun HUANG Haiyan(Key Laboratory of Modern Toxicology of Shenzhen, Shenzhen Center for Disease Control and Prevention, Shenzhen 518055, Guangdong School of Public Health, Nanchang University, Nanchang 330031, Jiangxi, China)

机构地区：[1]深圳市疾病预防控制中心,现代毒理学重点实验室,广东深圳518055 [2]南昌大学公共卫生学院,江西南昌330031

出　　处：《癌变．畸变．突变》2017年第1期42-45,50,共5页Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis

基　　金：国家自然科学基金(81370080,81001261);深圳市未来产业专项资金(ZDSYS20140509101335476)

摘　　要：目的:通过分析苯并芘(BaP)诱导细胞恶性转化过程中DNA甲基化水平的变化,探讨BaP致癌的作用机制。方法:以正常人支气管上皮细胞(16HBE)为研究对象,使用梯度浓度BaP(0、10、20和40μmol/L)染毒处理,构建不同染毒周期(1周、9周和15周)的细胞株,使用5-甲基胞嘧啶(5-mC)细胞免疫荧光检测各组细胞基因组DNA整体甲基化水平的变化,并进一步利用Western blotting和实时荧光定量-PCR技术分析不同染毒周期细胞甲基化蛋白酶(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD2)表达的变化。结果:BaP染毒后,16HBE细胞的5-mC荧光强度表达下降,且随着染毒剂量的增加和染毒时间的延长,这种下降趋势更明显,其中40μmol/L BaP染毒处理细胞15周时,肉眼已难以观察到可见荧光。与对照组比较,BaP染毒可下调细胞DNMT1蛋白及其mRNA的表达,并呈现明显的剂量和时间反应关系(P均<0.05),但DNMT3a、DNMT3b、MBD2蛋白的表达变化不明显(P均>0.05)。结论:BaP可诱导16HBE细胞基因组DNA整体甲基化水平下调,DNMT1在其中可能发挥重要作用。OBJECTIVE： To investigate the role of DNA methylation as a possible mechanism of Benzo[a]pyrene （BaP） induction of malignant transformation in vitro. METHODS： Human bronchial epithelial cells （16HBE cell line） were treated with different concentrations BaP （0,10,20 and 40 μmol/L） for 1,9 and 15 weeks. Then,5-methylcytosine immunofluorescent assay was used to detect genomic DNA methylation level,Western blotting and RT-PCR were used to detect protein and mRNA levels of DNMT1,DNMT3a,DNMT3b and MBD2. RESULTS： BaP treatment decreased expression of 5-mC （methylation） in 16HBE cells in a dose- and time-dependent manner. The protein and mRNA levels of DNMT1 showed in a significant dose- and time-dependent reduction （P 〈 0.05）,but there were no signi fi-cant changes in protein levels of DNMT3a,DNMT3b and MBD2（all P 〉 0.05）. CONCLUSION： BaP treatment decreased the global DNA methylation levels in 16HBE cells and reduction of DNMT1 expression could play an important role.

关 键 词：苯并芘 DNA甲基化 恶性转化 

分 类 号：R730.231[医药卫生—肿瘤]