滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究  

作　　者：赵爽[1] 董栩[1] 许燕[1] 李国栋[1] 

机构地区：[1]云南中医学院中药学院,云南昆明650500

出　　处：《时珍国医国药》2017年第1期250-252,共3页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(No.81160502);云南省自然科学基金(No.2011FZ153)

摘　　要：目的为了研究可溶性无机焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase)基因在滇重楼生长发育中的功能,对滇重楼的s PPase基因进行了克隆、序列分析和原核表达研究。方法根据滇重楼c DNA文库中筛选到的s PPase的EST序列,克隆了滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase的c DNA全长序列;运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析;将Pps PPase插入到原核表达载体p EASY-E1上,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行诱导表达。结果滇重楼中Pps PPase的开放阅读框ORF为621bp,编码206个氨基酸,与高粱中s PPase的氨基酸序列相似性最高为94%;Pps PPase编码的蛋白相对分子质量是23.4k Da,理论等电点p I为5.6,特异识别区域即位于98-104位之间即DNDPMDV。成功构建了原核表达载体p EASY-E1-Pps PPase,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经SDS-PAGE分析表明Pps PPase在大肠杆菌中能够表达,当IPTG诱导2h时表达量较高。结论首次从滇重楼中克隆得到可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase,为滇重楼生长发育分子机制的研究提供参考。

关 键 词：滇重楼 可溶性无机焦磷酸酶 基因克隆 原核表达 

分 类 号：R2-03[医药卫生—中医学]