RhoA／mDial参与LPS诱导肺微血管内皮细胞表达p-ERM  

RhoA/mDial pathway involved in the expression of p-ERM in the pulmonary micro-vascularendothelial cell induced by lipopolysaccharide

作　　者：刘雪婷[1] 孙耕耘[1] 尤青海[1] 费黎明[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学第一附属医院呼吸内科,合肥230022

出　　处：《中华急诊医学杂志》2017年第3期272-277,共6页Chinese Journal of Emergency Medicine

基　　金：国家自然科学基金（81370170,81100053）

摘　　要：目的探讨脂多糖（LPS）是否影响大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）磷酸化埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白（p-ERM）的表达及与RhoA／mDial的关系。方法于安徽医科大学第一附属医院呼吸内科实验室，取购自安徽省实验动物中心的健康雄性、体质量100—120g、SPF级sD大鼠的肺脏，体外培养PMVEC，随机（随机数字法）分为量效组、时效组和干预组（1μg/mL RhoA抑制剂（C3transferase）与PMVEC预孵育240min再加入10μg／mL的LPS继续孵育30min），Western印迹检测ERM、p-ERM及mDial表达量。多组变量间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD—t检验方法分析，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果PMVEC中均表达ERM、P—ERM及mDial。量效组p-ERM和mDial表达随LPS浓度（0、0．1、1、10μg/mL）增加而升高：p-ERM为（0．520±0．101）、（0，657±0．092）、（0．891±0．167）、（1．227±0．106），0μg/mL组与0．1μg/mL组比较，P〉0．05，其余P〈0．01；mDial为（0．200±0．102）、（0．430±0．121）、（0．603±0．154）、（0．887±0．204），0．1μg/mL组与1μg/mL组比较，P〉0．05；其余P〈0．05。时效组p-ERM表达量于15min开始上升（0．670±0．149），30min出现高峰（1．175±0．103），之后下降，60min（0．959±0．189），90min（0．842±0．129），120min仍持续较高水平（0．767±0．097），表达量均高于对照组（0．471±0．157），差异具有统计学意义（15min组与120min组比较、60min组与90min组比较及90min组与120min组比较，P〉0．05；其余P〈0．05）；mDial表达量于15min开始上升（0．779±0．035），30min达高峰（0．889±0．036），之后下降，60min（0．648±0．019），90min（0．582±0．068），120min仍持续较高水平（0．526±0．059），均高于对照组（0．284±0．118），差异有统计学意义（均P〈0．01）。C3transferase能显著下调LPS诱导的p-ERM的表达[对照�Objective To investigate the possibility of the involvement of RhoA/mDial pathway to cause the expression of phosphorylate ezrin-radixin-moesin （p-ERM） in rat pulmonary micro-vascular endothelial cell （PMVEC） after the stimulation of lipopolysaccharide （LPS）. Methods The specimens of lung tissue were taken from healthy male SPF grade SD rat with 100 - 120 g body weight which waspurchased from the laboratory animal center of Anhui province. After culture, the PMVECs were randomly divided into dose-dependent groups （0, 0. 1, 1, 10 μg/mL LPS added in PMVECs and cultured for 30 rain, n = 8 in each）, time-dependent groups （10 μg/mL LPS added to PMVECs cultured for 0, 15, 30, 60, 120 min, n = 8 in each） and intervention group （ n = 8）. In the intervention group, PMVECs were cultured with 1 μg/mL C3 transferase in serum free media for 240 min, followed by treatment with 10 μg/mL LPS for 30 rain. Meanwhile, two control groups in serum-free DMEM medium were made by adding 10 μg/mL LPS to PMVECs and 1 μg/mL C3 transferase to PMVECs respectively cultured for 30 rain （n = 8 in each）. Western blot was used to detect the level of p-ERM, ERM and mDial. Data were analyzed with SPSS 16. 0 software, while one way analysis of variance （ANOVA） was used to compare multiple sets of variables, the intergroup comparisons were analyzed by the least-significant-difference （LSD） tests, with P 〈 0.05 for the statistically significant difference. Results ERM, p-ERM and mDial were presented in rat PMVEC. Stimulation with LPS up-regulated p-ERM, mDial in a dose-dependent manner： LPS [ 0 μg/mL LPS group： （0. 520 ±0. 101）, 0. 1 μg/mL LPS group： （0. 657 ±0. 092）, 1 μg/mL LPS group： （0. 891 ±0. 167）, 10μg/mLLPS group： （ 1. 227 ±0. 106） ; 0 μg/mL group vs. 0. 1 μg/mL group, P 〉0. 05 ; the rest P 〈 0. 01 ） ; and raDial [0 μg/mL LPS group： （0. 200 ±0. 102）, 0. 1 μg/mL LPS group： （0. 430±0. 121 ）, 1 μg/mLLPS group： （0. 603 ±0. 154）, 10 μg/m

关 键 词：脂多糖 肺微血管内皮细胞 埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白 炎症 急性呼吸窘迫综 合征 RhoA/mDial 

分 类 号：R563.8[医药卫生—呼吸系统]