腺苷A2A受体激动剂联合骨髓间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭小鼠负向免疫调节作用的研究  

Effect of adenosine A2A receptor agonist combined with bone marrow mesenchymal stem cells transplantation on the negative immune regulation in mice with acute liver failure

作　　者：肖茜茜[1] 王永林[1] 陈泽[1] 萧云蕾 许烂漫[1] 林镯[1] 王晓东[1] 陈永平[1] Xiao Xixi Wang Yonglin Chen Ze Xiao Yunlei Xu Lanman Lin Zhuo Wang Xiaodong Chen Yongping.(Department of Infectious Diseases, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, Chin)

机构地区：[1]温州医科大学附属第一医院感染科温州市肝脏病重点实验室温州医科大学肝病研究所,浙江省温州市325000

出　　处：《中华传染病杂志》2017年第1期15-21,共7页Chinese Journal of Infectious Diseases

基　　金：国家自然科学基金（81570514、81500477）;浙江省自然科学基金（LY15H030017、LQ15H030006）;温州市科技局（Y20150014）;北京医学奖励基金（YJHYXKYJJ-162）;温州市终来期肝病的预警与干预治疗科技创新团队（C20150005）;王宝恩肝纤维化研究基金（xjs001）;中华医学会科研项目（15030230611）

摘　　要：目的探讨腺苷A2A受体激动剂（CGS21680）联合骨髓间充质干细胞（BMMSC）移植治疗急性肝功能衰竭（ALF）的疗效及可能机制。方法50只6～8周雄性C57BL/6小鼠普通饲养1周后，采用随机数字法将小鼠分为健康对照组6只，模型对照组11只，BMMSC组11只，CGS21680/BMMSC组11只，CGS21680组11只。除健康对照组外，其余小鼠腹腔注射D-GalN和脂多糖建立ALF模型。10 h后，CGS21680/BMMSC组、CGS21680组腹腔注射腺苷A2A受体激动剂CGS21680（2.1 mg/kg）。另外，BMMSC组、CGS21680/BMMSC组尾静脉注射BMMSC 1×10^6/只。24 h后，苏木精-伊红染色观察肝脏组织病理变化，流式细胞仪检测各组小鼠脾脏Treg占CD4＋T淋巴细胞比例变化，ELISA试剂盒检测血清炎性因子IL-6、TNF-ɑ含量，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测肝组织TLR4、核因子-κB表达水平。应用单因素方差分析（one-way ANOVA）和SNK-q检验。结果健康对照组血清IL-6为（23.67±2.97） pg/mL，模型对照组为（151.47±6.03） pg/mL，BMMSC组为（72.10±3.74） pg/mL，CGS21680/BMMSC组为（53.35±2.50） pg/mL，CGS21680组为（84.85±3.25） pg/mL，健康对照组与其他4组比较差异均有统计学意义（t值分别为46.02、25.51、19.58和34.03，均P〈0.01）。健康对照组血清TNF-ɑ水平为（24.62±3.19） pg/mL，模型对照组为（102.25±2.10） pg/mL、BMMSC组为（54.71±2.23） pg/mL，CGS21680/BMMSC组为（42.20±4.72） pg/mL，CGS21680组为（81.76±3.50） pg/mL，健康对照组与其他4组比较差异均有统计学意义（t值分别为46.49、19.97、7.72和29.57，均P〈0.01）。健康对照组脾脏Treg比例与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义（t值分别为51.67、12.22、5.91和18.21，均P〈0.01）。健康对照组肝组织TLR4 mRNA水平与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义（t值分别为26.31、21.33、1Objective To investigate the therapeutic effect and possible mechanism of adenosine A2A receptor agonist （CGS21680） combined with bone marrow mesenchymal stem cells （BMMSC） transplantation in acute liver failure （ALF）. Methods Fifty male C57BL/6 mice, 6-8 weeks old, were fed with standard diet for 1 week and randomly divided into 5 groups according to random number table： healthy control group （n = 6）, model group （n= 11）, BMMSC group （n = 11）, CGS21680/BMMSC group （n= 11） and CGS21680 group （n = 11 ）. Except healthy control group, the other mice were injected with D-GalN and lipopolysaccharide （LPS） to establish ALF model. Ten hours later, CGS21680/BMMSC group and CGS21680 group were injected intraperitoneally with adenosine A2A receptor agonist CGS21680 （2.1 mg/kg）. In addition, the BMMSC group and CGS21680/BMMSC group were injected BMMSC （1 × 10^6） through tail vein. After 24 hours, pathological changes of liver tissue was observed by hematoxylin and eosin staining. The change of proportion of mouse splenic Treg among CD4^＋ T lymphocytes was detected by flow cytometry. Toll-like receptor （TLR）4 and nuclear factor （NF）-κB expression levels in liver tissue were detected by real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR） and Western blot. One-way analysis of variance （one-way ANOVA） and SNK-q test was conducted for data analysis. Results Serum IL-6 levels were （23.67±2.97） pg/mL in healthy control group, （151.47±6.03） pg/mL in model control group, （72.10±3.74） pg/mL in BMMSC group, （53.35±2. 50） pg/mL in CGS21680/BMMSC group and （ 84.85 ±3.25） pg/mL in CGS21680 group. The differences between healthy control group and the other 4 groups were all statistically significant （t=46.02, 25.51, 19.58 and 34.03, respectively, all P〈0. 01）. Serum TNF-α levels were （24.62±3.19） pg/mL in healthy control group, （102.25±2.10） pg/mL in model control group, （54. 71 ± 2.23） pg/mL in BMMSC group, �

关 键 词：间质干细胞 肝功能衰竭 急性 受体 腺苷A2A Toll样受体4/核因子-κB信号通路 

分 类 号：R575.3[医药卫生—消化系统]