人骨诱导因子和绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体的构建和鉴定及在HT-29细胞中的表达  

作　　者：霍永旭 李宇[2] 刘雁军[3] 郭元彪[4] 杨春蕾[1] 赵聪[2] 

机构地区：[1]四川大学生命科学院,四川成都600031 [2]成都市第三人民医院消化内科 [3]成都市第三人民医院普外科 [4]成都市第三人民医院实验医学研究部

出　　处：《中国老年学杂志》2017年第6期1332-1334,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：四川省科技厅资助项目(No.14ZC1219);成都市卫生局资助项目(No.2013089);成都市科技厅资助项目(No.2014-HM01-00217-SF)

摘　　要：目的构建和鉴定人骨诱导因子基因(hOGN)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人大肠癌细胞株HT-29中的表达水平。方法采用PCR方法克隆hOGN基因;将hOGN基因连接到带有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒pEZ-hOGN-SV40-eGFP-IRES-Puro(pEZ-hOGN)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-PacHIVmix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的pEZ-hOGN感染HT-29细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后HT-29细胞中GFP表达情况和目的基因hOGN的表达情况。结果基因测序分析证实克隆的hOGN基因与GenBank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实OGN正确插入pEZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1×10~9TU/ml。在HT-29细胞中重组病毒感染96h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在HT-29细胞中hOGN蛋白过表达。结论成功构建携带hOGN基因的重组慢病毒载体,在HT-29细胞中有效表达。

关 键 词：骨诱导因子 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 HT-29细胞 

分 类 号：R34[医药卫生—基础医学]