SUMO-β-抑制蛋白2融合基因的克隆、表达与蛋白纯化  

Cloning and Expression of SUMO-β-arrestin2 Fusion Gene and Purification of Recombinant Protein

作　　者：张耀方[1] 许艳玲[1] 黄治强[1] 杜莉[1] 陈曦[1] 付裕[1] 李明刚[2] 

机构地区：[1]天津农学院基础科学学院,天津300384 [2]南开大学生命科学学院,天津300071

出　　处：《天津农学院学报》2017年第1期48-51,共4页Journal of Tianjin Agricultural University

基　　金：南开大学药物化学生物学国家重点实验室开放基金项目"重组胰高血糖素样肽-1纳米控释体的研究"(20163001);国家自然科学基金青年项目"具有开关功能胰岛素载体的制备及葡萄糖响应性的研究"(21404082);天津农学院大学生创新创业训练计划项目"多拷贝功能互补型双元促胰岛素的构建及其降糖活性的研究"(201610061074)

摘　　要：2型糖尿病是一种常见的慢性疾病,其发生与胰岛素的耐受相关。β-抑制蛋白2(β-arrestin2)的缺失或功能紊乱,会导致胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生。而使用β-arrestin2进行治疗可明显缓解葡萄糖不耐受及胰岛素抵抗。本研究通过重组PCR方法,将小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)与β-arrestin2基因融合,再将融合基因插入原核表达载体p ET22b中,成功构建了p ET22b-SUMO-β-arrestin2表达载体,将重组表达载体转入大肠杆菌Rosetta Blue(DE3)宿主细胞,使用IPTG在温度为20℃诱导表达,再将诱导表达后的蛋白经Ni-NTA进行纯化,成功获得SUMO-β-arrestin2蛋白,为后续β-arrestin2药效学的研究奠定基础。Type 2 diabetes is acommon chronic disease, and it is associated with insulin resistance. Loss or dysfunction of β-arrestin2 results in the development of insulin resistance and progression of type 2 diabetes. However, administration of β-arrestin2 significantly amend glucose intolerance and insulin resistance. In this article, We fused SUMO and β-arrestin2 gene with recombinant PCR methods, and then inserted it into pET22b vector, and constructed a expression vector pET22b-SUMO-β-arrestin2 successfully. A recombinant expression plasmid was expressed in Rosetta Blue （DE3） line of E.coli with IPTG at the temperature of 20 ℃. The SUMO-β-arrestin2 fusion protein was purified with Ni-NTA successfully. Lay the foundation for subsequent pharmacodynamic research of β-arrestin2.

关 键 词：β-抑制蛋白2 糖尿病 表达 纯化 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程]