APOBEC3B羧基端抗乙肝病毒位点的筛选和鉴定  

Screening and identification of key sites for anti-hepatitis B virus at the carboxyl terminal of APOBEC3B

作　　者：陈彦猛[1] 胡杰[1] 黄瑶[1] 袁琳[2] 周星[1] 胡源[1] 

机构地区：[1]重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆400016 [2]重庆医科大学基础医学院病原微生物教研室,重庆400016

出　　处：《重庆医科大学学报》2017年第7期776-780,共5页Journal of Chongqing Medical University

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81471945);重庆市科委自然科学基金资助项目(编号:cstc2014jcyj A10075);重庆市教委科学技术研究资助项目(编号:KJ1600205)

摘　　要：目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点的突变体;Southern blot筛选APOBEC3B抑制HBV复制的重要区段和关键位点;不同DNA变性PCR(differential DNA denaturation PCR,3D-PCR)和克隆测序进行验证。结果:APOBEC3B羧基端脱氨酶活性中心周围的α3和α4螺旋区缺失后,其抗病毒活性消失;D316位点突变后APOBEC3B的脱氨酶活性和抗病毒活性消失。结论:APOBEC3B羧基端的D316位点是APOBEC3B脱氨酶和抗病毒的关键位点。Objective：To screen the important domains and key sites involved in deaminase and anti-hepatitis B virus （HBV） activity at the carboxyl terminal of APOBEC3B. Methods：We mapped three alpha helices regions （α2,α3, α4） nearby the active site and sites at alpha 4（D316, K320,E321,R327, D328） by site-directed mntagenesis to test whether the mutations alter anti-HBV function of APOBEC3B. Results：The α3 and α4 regions around the active site of deaminase at the carboxyl terminal of APOBEC3B were im- portant for anti-HBV;D316 site at the carhoxyl terminal of APOBEC3B was critical for inhibition of HBV depending on its deaminase activity. Conclusion：D316 is catalytically active and capable of restricting.

关 键 词：APOBEC3B 脱氨基 3D-PCR D316 

分 类 号：R373.21[医药卫生—病原生物学] Q789[医药卫生—基础医学]