毒死蜱和克百威体外联合染毒的细胞毒性机制  

Combined cytotoxicity mechanism of chlorpyrifos and carbofuran pesticides in vitro

作　　者：廉楠 苟练 王巧旭[2] 彭双清[3] 徐培渝[1] 

机构地区：[1]四川大学华西公共卫生学院营养食品卫生与毒理学系,成都610041 [2]上海市食品药品检验所药理毒理室 [3]军事医学科学院疾病预防控制所毒理学评价研究中心

出　　处：《卫生研究》2017年第4期621-627,共7页Journal of Hygiene Research

基　　金：国家"十一五"科技支撑计划(No.2006BAK02A00)

摘　　要：目的研究毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)与克百威(carbofuran,CF)单独及联合染毒对体外培养细胞株的毒性,并阐明联合作用模式。方法应用不同浓度的CPF(0、50、100、200和400μmol/L)和CF(0、25、50、100和200μmol/L)分别单独染毒大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞12 h,联合效应研究分别在低剂量(CPF 50μmol/L,CF 25μmol/L)和高剂量(CPF 200μmol/L,CF 100μmol/L)水平下混合染毒。染毒结束后,采用丁酰硫代胆碱法检测乙酰胆碱酯酶(ACh E)活性,二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS)的生成,硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,5,5'-二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)显色法测定细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。结果毒死蜱、克百威单独染毒时,对ACh E活性的抑制作用、PC12细胞内ROS的生成量、SOD及GPx的活性均显著高于对照组(P<0.01),MDA含量无明显变化。2×2析因设计分析联合效应结果表明,较低剂量水平下,CPF与CF之间无交互作用,较高剂量水平,CPF、CF之间存在交互作用(P<0.01),作用模式主要为协同作用。结论毒死蜱、克百威单独及联合染毒都具有细胞毒性,联合作用模式主要为协同作用,氧化应激可能是其产生细胞毒性的机制之一。Objective To evaluate the single and combined effects of chlorpyrifos（ CPF） and carbofuran（ CF） pesticides on cell lines cultured in vitro,and clarify the pattern of joint action. Methods Rat pheochromocytoma（ PC12 cells） were treated with different concentrations of CPF（ 0,50,100,200 and 400 μmol/L） and CF（ 0,25,50,100 and 200 μmol/L） for 12 h separately,the combined effects of two kinds of pesticides should be studied respectively in the low dose（ CPF 50 μmol/L,CF 25 μmol/L） and high dose（ CPF 200 μmol/L,CF 100 μmol/L） levels. After exposure, detectingacetylcholinesterase（ ACh E） activity and using fluorescent probe 2＇,7＇-dichlorfluorescin diacetate（ DCFH-DA）,thiobarbituric acid（ TBA） method,xanthine oxidation,5,5 ＇-dithio-bis-2-nitrobenzoic acid（ DTNB） coloration to detect the intracellular reactive oxygen species（ ROS） production, lipid peroxidation production malondialdehyde（ MDA）,activity of antioxidant enzymes superoxide dismutase（ SOD） and glutathione peroxidase（ GPx）,respectively. Results Compared with the control group,CPF and CF could decrease the ACh E activity,induce ROS overproduction in a dose-effect way and increase the activity of SOD,GPx（ P〈0. 01）,but MDA content showed no significant change. Factorial ANOVA revealed that the combined effect of CPF and CF,there was no interaction at lower dose level,but interaction existed at higher dose level（ P〈0. 01）.The main mode of action was synergistic effect. Conclusion Chlorpyrifos,carbofuran single or combined,has cytotoxicity effect. The main combined effect between chlorpyrifos and carbofuran is synergistic effect, oxidative stress damage may be one of the mechanisms.

关 键 词：毒死蜱 克百威 细胞毒性 Keap-Nrf2-ARE信号通路 

分 类 号：R595.4[医药卫生—内科学] S481.8[医药卫生—临床医学]