原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析  

Preliminary Immunogenicity of Prokaryotic Expressed Chicken Interleukin-10 for in Vivo Research

作　　者：王丽廷 王兴童 杨柳[2] 彭蔚宇[2] 孟兴[2] 陈洪岩[2] 高文伟[1] 韩凌霞[2] 

机构地区：[1]山西农业大学动物科技学院,太谷030801 [2]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室,哈尔滨150069

出　　处：《实验动物科学》2017年第3期1-5,共5页Laboratory Animal Science

基　　金：国家科技支撑计划子课题(No.2015BAI07B02-02)

摘　　要：目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。Objective To preliminarily analyze the immunogenicity of E. coli expressed chicken Interleukin-10 （chlL-10） antiserum in stably chIL-lO-expressing cell line transfected by chIL-10 gene with signal peptide （CHO- chIL-10F） and that without signal peptide （CHO-chIL-10M）. Method Whole chIL-10 gene was amplified by PCR from chicken peripheral blood lymphocytes and cloned into pET-30a （ ＋ ） vector to obtain recombinant plasmid of pET-chIL-10, followed by induce express in E. coli BL21 （DE3）. The SDS-PAGE gel containing foreign protein was immunized BALB/c mice to prepare antisera. Indirect immunofluorescent assay （IFA） and Western blot assay were performed. Result The mice anti-pET-chIL-10 specific serum could react with eukaryotic expressed chIL-10 in IFA and Western blot assay. Conclusion Antiserum to prokaryotic expressed chicken IL-10 could be used in vivo research study.

关 键 词：鸡白介素-10 原核表达 鼠抗血清 体内实验 

分 类 号：Q95-3[生物学—动物学]