用CRISPR/CAS9系统构建原位表达dPit:GFP的果蝇品系  

Generate a dPit:GFP fly stock with the CRISPR/Cas9 system

作　　者：李博[1] 胡君诚 金珊[1] 

机构地区：[1]湖北大学生命科学学院,湖北武汉430062

出　　处：《湖北大学学报（自然科学版）》2017年第5期462-467,共6页Journal of Hubei University：Natural Science

基　　金：国家自然科学基金(31230045;81471154)资助

摘　　要：SLC20A2基因是Ⅲ型纳磷转运蛋白2(PiT2)的编码基因,PiT2可将无机磷从细胞外运送至细胞内.SLC20A2基因突变导致PiT2不能正常地将无机磷运送到细胞内,血液中的无机磷含量升高,磷和钙离子结合形成沉淀,堵塞血管.SLC20A2基因在果蝇中的同源基因是CG42575(dpit).本实验使用CRISPR/CAS9系统,构建原位表达dPiT:GFP的果蝇品系,将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)编码序列插入dpit基因末端,使果蝇表达dPiT:GFP融合蛋白.该融合蛋白可以被dPiT及GFP的抗体同时识别,通过荧光直接观察dPiT:GFP的位置,从而准确定位dpit,进而为dpit基因的功能研究提供基础.Phosphate can be transported to intracellular by type Ⅲ Na^＋/Pi co-transporters（ PiT2）,which is coded by SLC20A2. In the SLC20A2 mutants,phosphate precipitates with Ca^2＋ in the blood and block blood vessels. The homologous gene of human SLC20A2 is the CG42575（ dpit） in Drosophila. In our study,we used CRISPR/CAS9 system to insert the green fluorescent protein（ GFP） in the carbon end of dpit to get a Drosophila,which expresses the dPi T： GFP fusion protein. The dPiT： GFP fusion protein could be observed by GFP fluorescence directly and stained by the antibody of dPi Tor GFP. It is a useful tool to locate the dpit exactly and to investigate the dpit function.

关 键 词：果蝇 CRISPR/CAS9系统 SLC20A2 dpit 

分 类 号：Q789[生物学—分子生物学]