三桠苦ISSR反应体系的优化与引物筛选  

作　　者：罗登花 刘军民 韩正洲 邢建永[2] 詹若挺 

机构地区：[1]中药学院教育部重点实验室(广州中医药大学),广东广州510006 [2]华润三九医药股份有限公司,广东深圳518002 [3]广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学),广东广州510006

出　　处：《时珍国医国药》2017年第8期1988-1991,共4页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家中药标准化项目(国中医药办科技涵【2015】125号);广东省普通高校创新团队项目-中药资源创新研究团队(No.2016KYTD02)

摘　　要：目的构建三桠苦ISSR反应体系,为三桠苦种质资源遗传多样性分析及分子鉴定奠定基础。方法通过设定影响三桠苦ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测不同反应体系的扩增效果,对条件进行优化,并筛选引物及退火温度,建立三桠苦ISSR-PCR最适反应体系,并用23个不同三桠苦样品验证体系稳定性。结果首次建立了三桠苦ISSR最佳反应体系(25μl):Master Mix 12.5μl(Mg2+浓度4 mmol/L,d NTP浓度0.4mmol/L)、引物0.6μmol/L、模板DNA 20ng。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的12条引物。结论所建立的三桠苦ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,这一体系的建立及引物筛选可应用于三桠苦种质资源评估及遗传多样性分析的研究。

关 键 词：三桠苦 ISSR 种质资源 体系优化 引物筛选 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学]