芒果CDDP分子标记正交优化设计及引物筛选  

Orthogonal optimization of CDDP-PCR system and primer screening for mango

作　　者：张宇[1] 黄国弟[1] 黄强[1] 莫永龙[1] 覃旭[1] 郭丽梅[1] 

机构地区：[1]广西壮族自治区亚热带作物研究所,广西南宁530001

出　　处：《福建农林大学学报（自然科学版）》2017年第5期546-551,共6页Journal of Fujian Agriculture and Forestry University:Natural Science Edition

基　　金：广西自然科学基金(2016GXNSFAA380164);广西自然科学基金资助项目(2015GXNSFBA139085);农业产业技术体系广西创新团队建设专项资助项目(nycytxgxcxtd-06-01)

摘　　要：以芒果基因组DNA为模板,选择正交设计试验对控制DNA保守序列多态性——聚合酶链式反应(CDDP-PCR)的4个因素(模板DNA浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Mg^(2+)DNA聚合酶用量)进行正交试验,构建了较佳的芒果CDDP-PCR反应体系,含0.50 U Mg2+DNA聚合酶、0.40 mmol·L^(-1)d NTPs、1.00μmol·L^(-1)引物、0.50 ng·μL^(-1)模板DNA,加双蒸水使得总体积达20.00μL.对比四因子对PCR反应的影响,影响最强的因素是含Mg2+的DNA聚合酶,影响最弱的因素是模板DNA.利用供试的20个芒果品种验证了该体系的稳定性和可行性,21条CDDP引物均可扩增出明晰整齐的条带.To optimize the conserved DNA sequence polymorphism polymerase chain reaction （ CDDP-PCR） for mango, orthogonal experiment, including 4 factors of template DNA concentration, dNTPs concentration, primer concentration, Mg2＋DNA polymeras at 4 levels was designed, with mango genome DNA as template. The optimized CDDP-PCR system contained 0.50 U Mg^2＋ DNA poly-merase, 0.40 mmol·L^-1 dNTPs, 1 mol·L^-1 primer template DNA and 0.50 ng·μL^-1 DNA template, with double distilled water added to a total volume of 20μL. The results showed that Mg2＋DNA polymerase played the most important role in the PCR reaction, with DNA being the weakest factor. All 21 primers produced clear and neat bands for 20 mango species with the optimized condition.

关 键 词：芒果 CDDP 反应体系 引物筛选 优化 

分 类 号：S667.7[农业科学—果树学]