普伐他汀抑制脂多糖诱导的人绒毛外滋养细胞微小RNA-155表达并改善滋养细胞功能  

Pravastatin inhibits microRNA-155 expression and improves functions of lipopolysaccharide-treated human extravillous trophoblast cells

作　　者：王志尹 杨沐怿 段晓宇 刁振宇[3] 丁海林[3] 彭艳芳 雷祎 赵光锋[3] 刘丹 胡娅莉[1] 

机构地区：[1]南京医科大学鼓楼临床医学院妇产科,210029 [2]东南大学医学院妇产科,210009 [3]南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科,210008

出　　处：《中华围产医学杂志》2017年第10期705-711,共7页Chinese Journal of Perinatal Medicine

基　　金：国家自然科学基金（81370724）;江苏省临床医学中心建设项目（yxzxb2016004）;南京市产科与遗传临床中心建设项目

摘　　要：目的探讨普伐他汀对脂多糖诱导的人绒毛外滋养细胞（HTR-8/SVneo细胞）中微小RNA-155（microRNA-155，miR-155）表达及其对滋养细胞功能的影响。方法将体外培养HTR-8/SVneo细胞分成空白对照组、带绿色光蛋白的增强型质粒（enhanced plasmid with green fluorescent protein，pEGFP）-miR-155组（绿色荧光蛋白标记的miR-155质粒转染）、脂多糖组（脂多糖100 ng/ml）、miR-155抑制剂组＋脂多糖，普伐他汀＋脂多糖组（浓度分别为12.50、25.00、50.00、100.00 μg/ml普伐他汀预处理后，再加入100 ng/ml脂多糖）、普伐他汀＋pEGFP-miR-155组（50.00 μg/ml普伐他汀预处理后再转染pEGFP-miR-155）。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组miR-155的表达量、蛋白质印迹法检测各组AP-1亚基p-JunB和p-FosB蛋白的表达水平；检测细胞迁移、侵袭功能和凋亡情况。采用t检验进行统计学分析。结果（1）与空白对照组相比，pEGFP-miR-155组滋养细胞迁移距离较低[分别为（274.70±18.82）和（181.00±8.62）μm]，穿膜细胞减少[（123.00±4.36）和（63.00±6.08）个]，细胞凋亡率升高[分别为（5.40±0.68）%和（9.27±0.68）%]（P值均〈0.05）。与脂多糖组相比，miR-155抑制剂＋脂多糖组的迁移距离更长[（166.30±5.07）与（242.00±18.07） μm]，穿膜细胞增多[（71.67±6.12）与（109.00±7.81）个]，细胞凋亡率降低[（14.40±1.69）%与（6.23±0.44）%]（P〈0.05）。（2）脂多糖组HTR-8/SVneo细胞miR-155的mRNA表达水平为1.65±0.07，明显高于空白对照组的0.79±0.12（P〈0.05）。12.50、25.00、50.00、100.00 μg/ml普伐他汀＋脂多糖组的HTR-8/Svneo细胞中miR-155的mRNA表达水平分别为1.14±0.10、1.02±0.10、0.74±0.15和1.14±0.02，明显低于脂多糖组，其中以50.00 μg/ml普伐他汀降低程度最明显（P值均〈0.05）。（4）空白对照组、脂多糖组、50.00 μg/ml普伐他汀＋脂多糖组的磷酸化JunB的蛋白表ObjectiveTo investigate the effects of pravastatin on the expression of microRNA-155 （miR-155） and the functions of lipopolysaccharide （LPS）-treated extravillous trophoblast cells.MethodsIn vitro cultured HTR-8/SVneo cells were divided into the following groups： control group, enhanced plasmid with green fluoscent protein （pEGFP）-miR-155 group （transfected with green fluorescent protein-tagged miR-155）, LPS group （treated with 100 ng/mL of LPS）, miR-155 inhibitor＋LPS group, pravastatin＋LPS group （treated with 100 ng/mL of LPS following pretreatment with 12.50, 25.00, 50.00 and 100.00 μg/ml of pravastatin）, and pravastatin＋pEGFP-miR-155 group （transfected with pEGFP-miR-155 following pretreatment with 50 μg/ml of pravastatin）. Levels of miR-155 in HTR-8/SVneo cells treated with different strategies were measured by real-time polymerase chain reaction. Expression of phosphorylated JunB （p-JunB） and p-FosB proteins was analyzed by Western blotting. Migration, invasion and apoptosis of HTR-8/SVneo cells were also analyzed. All data were analyzed with t test.Results（1） Compared with the control group, HTR-8/SVneo cells in the pEGFP-miR-155 group were characterized by shorter migration distance [（274.70±18.82） vs （181.00±8.62） μm], less transmembrane cells [（123.00±4.36） vs （63.00±6.08）] and enhanced apoptosis [（5.40±0.68）% vs （9.27±0.68）%] （all P〈0.05）. （2） Compared with the LPS group, the miR-155 inhibitor＋LPS group showed longer migration distance of HTR-8/SVneo cells [（166.30±5.07） vs （242.00±18.07） μm, P〈0.05], more transmembrane cells [（71.67±6.12） vs （109.00±7.81）, P〈0.05] and decreased cell apoptosis [（14.40±1.69）% vs （6.23±0.44）%, P〈0.05]. （3） Expression of miR-155 at mRNA level in the LPS group was increased as compared with that of the control group （1.65±0.07 vs 0.79±0.12, P〈0.05）. Compared with the LPS group, pretreatment with 12.50, 25.00, 50.00 and 100.00 μg/ml of pra

关 键 词：普伐他汀 先兆子痫 滋养层 微RNAS 细胞运动 

分 类 号：R714.244[医药卫生—妇产科学]