大鼠肝脏3Alpha—羟类固醇脱氢酶cDNA的克隆与表达  

作　　者：周瑾[1] 张昕炯[1] 等 

机构地区：[1]第二军医大学生物化学与分子生物学教研室，中国上海200433

出　　处：《中华国际医学杂志》2002年第4期314-317,共4页

摘　　要：目的 克隆大鼠肝脏3Alpha-羟类固醇脱氢酶（3α-HSD）cDNA，构建大肠杆菌表达质粒pET-30a/3α-HSD,并诱导表达含6个组氨酸标记的pET-30a/3α-HSD融合蛋白。方法 从大鼠肝脏组织中提取总RNA，利用RT－PCR技术扩增出大鼠3α－HSD cDNA，克隆于pGEM-T载体中，测序筛选后，将正确序列的3α－HSD基因Bam HI/Xho I片段定向插入融合基因表达载体pET-30a的相应克隆位点上，构建重组质粒pET-30a/3α-HSD，并转化大肠杆菌BL21－Gold9DE3）pLysS。结果和结论 pGEM-T/3α-HSD序列分析发现，获得的大鼠肝脏3α－HSD cDNA在起始密码后的第814位碱基由T突变为C，与文献报道的仅一个碱基差别。构建的表达载体pET-30a/3α-HSD在大肠杆菌BL21－Gold(DE3）pLysS中能表达出融合蛋白，为进一步实验研究和临床应用创造了条件。

关 键 词：大鼠 肝脏 3Alpha-羟类固醇脱氢酶 CDNA 克隆 序列分析 基因表达 

分 类 号：Q789[生物学—分子生物学] Q786