水稻靶标基因单碱基定向替换技术的建立  

A CRISPR/Cas9 toolkit for efficient targeted base editing to induce genetic variations in rice

作　　者：任斌 严芳 旷永洁 李娜[1] 张大伟[2] 林宏辉[2] 周焕斌 

机构地区：[1]中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193 [2]四川大学生命科学学院,生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都610065

出　　处：《中国科学：生命科学》2017年第11期1177-1185,共9页Scientia Sinica(Vitae)

基　　金：中国农业科学院科技创新工程和植物病虫害国家重点实验室开放基金资助

摘　　要：目前CRISPR/Cas9技术作为一种基因组定点编辑技术已经被广泛应用于不同植物中,但是对于实现特定碱基替换仍具有很大难度.本研究将APOBEC1和UGI与Cas9n融合,开发了一种包含rBE3和rBE4的高效技术,并通过该技术对OsSERK1,OsSERK2,ipa1,pi-ta和OsBRI1等基因的靶位点碱基进行编辑.在T0代转基因植物中rBE3/sgRNA将胞嘧啶碱基转换为所有其他核苷酸碱基中效率高达38.9%;利用rBE4还获得了抗稻瘟基因pi-ta的隐性等位基因靶位点胞嘧啶碱基替换为胸腺嘧啶碱基,编辑效率达18.2%.此外,在所检测的材料中,并未检测到由Cas9n切口酶引起的InDel事件.这些结果表明,rBE3和rBE4技术的开发,在未来植物基础研究和农业应用中具有广阔的前景.

关 键 词：碱基编辑器 大鼠胞苷脱氨酶 CRISPR Cas9 功能获得性突变体 

分 类 号：Q943.2[生物学—植物学] S511[农业科学—作物学]