基于Gateway技术的E.stiedai孢子化卵囊cDNA表达文库构建  

Construction of cDNA expression libraries of E.stiedai sporulated oocysts by Gateway~ technology

作　　者：赵爱云[1,2] 齐萌 江春雨[1,2] 井波 

机构地区：[1]塔里木大学动物科学学院,新疆阿拉尔843300 [2]兵团塔里木畜牧科技重点实验室,新疆阿拉尔843300 [3]华中农业大学农业微生物国家重点实验室,湖北武汉430070

出　　处：《中国兽医学报》2017年第12期2315-2320,共6页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31160503;31560693);新疆生产建设兵团青年科技创新资金专项资助项目(2012CB023);新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室开放课题资助项目(HS201108)

摘　　要：为深入研究斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的分子生物学特征,揭示其与宿主细胞的互作及免疫机理,以E.stiedai阿拉尔分离株的新鲜孢子化卵囊为材料,采用Gateway技术分别构建了E.stiedai孢子化卵囊cDNA原核和慢病毒表达文库,并测定了文库质量。分析表明,表达文库平均插入片段大小为1.5kb,重组率为100%,慢病毒表达文库和原核表达文库容量分别为3.5×106,3.9×106 CFU/mL,符合高质量文库的标准,可用于进一步开展相关基因的克隆及功能研究,为研究E.stiedai的入侵及免疫机制奠定基础。For the further study of Eimeria stiedai （E. stiedai） molecular biological characteristics and revealing the mechanisms of interaction with host cells and immune,prokaryotic and lentiviral cDNA expression libraries of E. stiedai Alar strain （As） sporulated oocytes were constructed using Gateway technology. The library quality analysis indicated that the capacities of the original lentiviral expression library and prokaryotic expression library were 3. 5 × 10^6 CFU/mL and B. 9 × 10^6 CFU/mL,with a mean insert fragment size of 1.5 kb and the recombination rate of 100% ,according with the standard for high quality libraries. These E. stiedai eDNA expression libraries can be used for future cloning and functional studies of additional genes, and will lay the foundation for researching the invasion and immune mechanism of E. stiedai.

关 键 词：斯氏艾美耳球虫 GATEWAY技术 孢子化卵囊 CDNA表达文库 

分 类 号：S852.723[农业科学—基础兽医学]