T-2毒素对软骨细胞增殖及细胞周期的影响  

Effects of T-2 toxin on chondrocyte proliferation and cell cycle

作　　者：闫盼 付晓艳[2] 王红格 姜宇婷 邵汉文 卜野 荣胜忠 邹宁[2] 高彦辉 孙殿军 

机构地区：[1]哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病控制中心地氟病防治研究所国家卫生计生委病因流行病学重点实验室黑龙江省普通高校病因流行病学重点实验室,哈尔滨150081 [2]哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心实验室,哈尔滨150081

出　　处：《中华地方病学杂志》2018年第1期35-39,共5页Chinese Journal of Endemiology

摘　　要：目的研究T-2毒素对大鼠软骨细胞增殖和细胞周期的影响，为T-2毒素致软骨细胞损伤的分子机制研究提供新思路。方法提取新生Wistar大鼠的原代软骨细胞，通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行细胞鉴定。采用细胞增殖／毒性检测试剂盒（CCK-8）检测不同剂量的T-2毒素[0（对照），1、5、10、20、50、100μg／L]染毒24h对软骨细胞增殖的影响，根据细胞存活率选择对照，1、5、10μg/L（低、中、高剂量）T-2毒素用于后续实验。采用流式细胞术检测细胞周期变化；实时荧光定量PCR法和免疫印迹法分别检测T-2毒素对软骨细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）mRNA和蛋白表达水平的影响。结果随T-2毒素染毒剂量增加（对照，1、5、10、20、50、100μg／L），软骨细胞存活率降低[（100．00±0．00）％、（93．12±1．66）％、（77．12±1．11）％、（59．44±4．09）％、（46．64±3．86）％、（38．15±3．37）％、（33．79±0．99）％]，组间比较差异有统计学意义（F=139．21，P〈0．05）。1、5、10μg／L T-2毒素组静止期／DNA合成前期（G0／G1期）细胞[（22．03±O．42）％、（30．54±2．61）％、（36．01±1．51）％]均明显高于对照组[（13．79±1．65）％，P均〈0．05]；DNA合成期（S期）细胞[（60．27±3．53）％、（53．88±4．38）％、（49．55±2．49）％]均明显低于对照组[（76．72±4．24）％，P均〈0．05]。对照组，1、5、10μg/L T-2毒素组PCNA、Cyclin D1 mRNA水平组问比较差异有统计学意义（F=46．80、17．97，P均〈0．05），其中5、10μg／L T-2毒素组（0．77±0．13、0．79±0．08，0．60±0．07、0．56±0．05）均明显低于对照组（0．99±0．02、1．01±0．01，P均〈0．05）。5、10μg/L T-2毒素组PCNA蛋白水平（0．69±0．03、0．49±0．03）均低于对照组（O．92±0．05，P均〈0．05）；1、5、10�Objective To study the effect of T-2 toxin on proliferation and cell cycle of rat chondrocytes, in order to provide a new idea in molecular mechanism of T-2 toxin-induced chondrocyte damage. Methods Primary chondrocytes of neonatal Wistar rats were isolated and stained by toluidine blue staining and type Ⅱ collagen immunofluorescence staining. The effects of different concentrations of T-2 toxin [0 （control）, 1, 5, 10, 20, 50, 100 μg/L）] on proliferation of chondrocytes for 24 h were detected by cell counting kit-8 （CCK-8） method, and control, 1 （low dose）, 5 （medium dose）, and 10 μg/L （high dose） T-2 toxin were selected for subsequent experiment; cell cycle changes were detected by flow cytometry; Real-time PCR and Western blotting were used to detect the effects of T-2 toxin on mRNA and protein expressions of proliferating cell nuclear antigen （PCNA） and Cyclin D1 in chondrocytes. Results With increase of T-2 toxin concentration （control, 1, 5, 10, 20, 50, 100 μg/L）, the cell survival rates [（100.00 ± 0.00）%, （93.12 ± 1.66）%, （77.12 ± 1.11）%, （59.44 ± 4.09）%, （46.64 ± 3.86）%,（38.15 ± 3.37）%, （33.79 ± 0.99）%] were decreased, and the differences were statistically significant （F = 139.21, P 〈 0.05）. The percentages of quiescent phase/pre-DNA synthesis phase （G0/G1 phase） cells in 1, 5, 10 μg/L T-2 toxin groups [（22.03 ± 0.42）%, （30.54 ± 2.61）%, （36.01 ± 1.51）%] were significantly higher than that in control group [（13.79 ± 1.65）%, P 〈 0.05]; the percentages of DNA synthesis phase （S phase） cells [（60.27 ± 3.53）%, （53.88 ± 4.38）%, （49.55 ± 2.49）%] were significantly lower than that in control group [（76.72 ± 4.24）%, P 〈 0.05]. The differences of mRNA levels of PCNA and Cyclin D1 between groups were statistically significant （F = 46.80, 17.97, P 〈 0.05）, and 5, 10 μg/L T-2 toxin groups （0.77 ± 0.13, 0.79 ± 0.08, 0.60 ± 0.07, 0.56 ± 0.05） were lower than the control group �

关 键 词：T-2毒素 软骨细胞 细胞增殖 细胞周期 

分 类 号：R99[医药卫生—毒理学]