巨噬细胞分化抗原-1通过脾酪氨酸激酶通路促进破骨细胞分化  

Macrophage differentiation antigen- 1 promotes osteoclastogenesis via spleen tyrosine kinase pathway

作　　者：杨国曦 陈晓勇[1] 朱庆生[1] 杨重飞[1] 

机构地区：[1]第四军医大学附属西京医院骨一科,西安710032

出　　处：《中华实验外科杂志》2018年第1期5-7,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家自然科学基金（81301541）

摘　　要：目的探讨巨噬细胞分化抗原-1（Mac-1）分子在核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）诱导下破骨细胞分化中的作用。方法用RANKL及巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导C57BL/J6小鼠脾细胞，并使用抗CD11b及CD18抗体进行处理，1周后进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，测定细胞TRAP染色阳性率并进行统计学分析；用相同方法于载有骨片的96孔板上培养破骨细胞，利用抗CD11b、CD18抗体，干扰CD11b基因表达的慢病毒及其对照空载病毒转染，对骨片进行扫描电镜拍照并计算骨陷窝面积；提取各组细胞总核糖核酸（RNA）并进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR），测定各组蛋白质对应信使RNA（mRNA）表达水平。结果对照组、抗CD11b抗体组、抗CD18抗体组及双抗体组平均每孔TRAP阳性细胞数分别为（29.5±4.7）、（17.1±3.8）个（P＝0.026）、（26.2±5.1）个（P＝0.124）、（19.4±4.3）个（P＝0.018），骨陷窝面积分别为（6.1±3.4）、（2.2±1.1）10－2 mm2/片（P＝0.011）、（5.8±2.9）10－2 mm2/片（P＝0.124）、（2.4±1.3）10－2 mm2/片（P＝0.027），对照病毒组及病毒转染组骨陷窝面积分别为（5.6±3.2）、（1.3±0.9）10－2 mm2/片（P＝0.006）；相对于对照组和抗CD18抗体组，抗CD11b抗体处理的两组活化T细胞核因子-1（NFATc1）、脾酪氨酸激酶（Syk）和c-Fos mRNA表达下调。与对照病毒组比较，病毒转染组NFATc1、Syk和c-Fos mRNA表达下调。结论Mac-1分子通过其亚基CD11b上调Syk与c-Fos，促进NFATc1的表达，最终发挥促破骨细胞分化效应，而CD18亚基不具备促进作用。ObjectiveTo investigatethe effect of Mac-1 onosteoclast differention induced by RANKL and related signaling pathways.MethodsSpleen cells from 4-week-old C57BL/J6 mouse were treated with anti-CD11b, CD18 antibodies and inducedby（receptor activator for nuclear factor-κB ligand （RANKL）, macrophage colony-stimulating factor （M-CSF）. tartrate resistant acid phophatase （TRAP） staining was performed with TRAP kit; Spleen cells were cultured on bone silcesand treated with anti-CD11b, CD18 antibodies, lentivirus to silent CD11b gene and its control lentivirus, after induced by RANKL and M-CSF for 1week, bone resorption assay was performed; The mRNA levels of spleen tyrosine kinase （Syk）, c-Fos and nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic-1 （NFATc1） were measuredusing reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and Real-time PCR.ResultsThe number of TRAP positive cells of control group, anti-CD11b antibody treatment group, anti-CD18 antibody treatment group and two antibodies treatment group were （29.5±4.7）, （17.1±3.8） cells （P=0.026）, （26.2±5.1） cells （P=0.124）, （19.4±4.3） cells （P=0.018）, the bone resorption area were （6.1±3.4）, （2.2±1.1） 10-2 mm2/slice （P=0.011）, （5.8±2.9） 10-2 mm2/slice （P=0.124）, （2.4±1.3） 10-2 mm2/slice （P=0.027）, bone resorption area of control lentivirus group and lentivirus group were （5.6±3.2）, （1.3±0.9） 10-2 mm2/slice （P=0.006）; Syk, c-Fos and NFATc1 mRNAlevels of groups treated with anti-CD11b antibodyor lentivirus weredownregulated.ConclusionMac-1 can promote osteoclast differentiation via Syk pathway activated by CD11b. CD18 does not have this effect.

关 键 词：骨质疏松 特异性抗体 慢病毒 

分 类 号：R580[医药卫生—内分泌]