KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响  

Effect of E23K Mutant of K_(ATP) Channel on Apoptosis Induced by Adriamycin

作　　者：刘剑芳[1] 王梦龙[1] 叶晶[1] 徐瑶[1] 王震[1] 姜慧敏[1] 叶迪 赵生娣 万军[1] 

机构地区：[1]武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所、心血管病湖北省重点实验室,430060 [2]武汉市普仁医院心内科,430081

出　　处：《医学研究杂志》2018年第2期28-31,共4页Journal of Medical Research

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81170208)

摘　　要：目的研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 (1)在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取c DNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的p EGFP-C1连接,重组的p EGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒p EGFP C1/kir6.2,p EGFP C1/kir6.2(E23K)及p EGFP C1/SUR2A。(2)重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。(3)生理盐水与1mg/L阿霉素(Adriamycin,ADR)分别处理转染后细胞,分为4组:A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组(WT+NS);B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组(E23K+NS);C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组(WT+ADR);D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组(E23K+ADR)。(4)采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI)。(5)Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。Alpha Ease FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 (1)TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高(P<0.05)。(2)阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax)表达均增高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组(P<0.05)。结论 K_(ATP)通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。Objective To investigate the effect of E23K mutant on kir6.2 subunit of KATP channel on myocardial cell apoptosis in- duced by Adriamyein. Methods （ 1 ） Total RNA was obtained in myocardial tissue and cDNA was obtained by RT - PCR method. Using specific primers to get ORF fragments of kir6.2, SUR2A by PCR method, using T4DNA ligase to connected the fragment with linearized pEGFP - C1, restructuring pEGFP - C1/kir6.2（E23K） by point mutation fixed in the PCR method, then get the pEGFP - C1/kir6.2, pEGFP- C1/kir6.2 （E23K） and pEGFP- C1/SUR2A. （2） The plasmid transient transfected the H9C2 cells and expressed the target proteins. （3） Saline and lmg/L adriamyein （ADR） add to the ceils after transfection, divided into four groups. A： wild type and saline treatment group （WT ＋ NS） ; B： E23K mutation and saline treatment group （E23K ＋ NS） ;C：Wild type and Adriamycin treatment group （WT ＋ ADR） ;D： E23K mutation and adriamycin treatment group （E23K ＋ ADR）. （4） TUNEL method to detect myocardial apoptosis index （AI）. （5） The Western blot method to test caspase -3, Bcl -2, Bax protein expression. Alpha Ease FC software to read grey value. Results （ 1 ） TUNEL results showed that with an increase in apoptosis after application of ADR, compared with （ WT ＋ ADR） group, apoptosis rate of （E23K ＋ ADR） group was higher. （2） After being treated with Adriamycin, the expression of caspase - 3 and Bax proteins of all groups were increased, while the Bcl -2 was decreased, and in （E23K ＋ ADR） group, the expression of caspase - 3, Bax protein were increased than in （WT ＋ ADR） group but Bcl - 2 decreased （ P 〈 0.05 ）. Conclusion E23K mutation aggravated the apoptosis of myocardial cell induced by Adriamycin.

关 键 词：KATP通道E23K突变细胞凋亡 

分 类 号：R542.2[医药卫生—心血管疾病]