迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定共表达HCT116^(MIIP-Luc)结肠癌细胞系的建立  

作　　者：熊欣 颜广[1] 王秦豪[1] 茹懿[1] 严奉奇 李霞[1] 

机构地区：[1]第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2018年第2期136-140,共5页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金(81572504;81502405)

摘　　要：目的建立迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系,为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型。方法将MIIP基因插入慢病毒载体p LEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体p LEX-MCS-HA-MIIP。利用该重组载体p LEX-MCS-HA-MIIP及包装载体VSVG、△8.9,共转染HEK293T细胞,包装表达MIIP的慢病毒,将其感染HCT116细胞后,采用适宜浓度的嘌呤霉素筛选,建立MIIP稳定过表达的HCT116细胞。利用表达荧光素酶报告基因的慢病毒进行二次感染,建立MIIP和荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞。利用实时荧光定量PCR检测MIIP的mRNA水平,Western blot法检测MIIP蛋白水平,小动物活体成像技术观察HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞的荧光强弱。结果成功建立了MIIP荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞,在HCT116MIIP-Luc细胞中实现了MIIP过表达,生物发光成像结果显示HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞均可产生较强的荧光。结论分别建立了可传代的MIIP过表达及荧光素酶报告基因稳定共表达的结肠癌HCT116细胞株。

关 键 词：结肠癌 迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP) 荧光素酶报告基因 慢病毒感染 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学] Q786[医药卫生—基础医学]