一种快速检测猪伪狂犬病毒野毒株的普通PCR方法的优化研究  

作　　者：王凤求 侯文凤 李中圣 王贵平 

机构地区：[1]广东海大畜牧兽医研究院有限公司,广州511400 [2]华南农业大学,广州510642 [3]广东海大集团股份有限公司,广州511400

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2018年第13期138-141,共4页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：广东省省级科技计划项目(2015B020203006)

摘　　要：为了快速、便捷运用普通PCR对猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）野毒株进行检测,试验选取PRV g B、g E基因保守区序列,设计2对特异性引物,通过正交试验设计探索最优水平组合的PCR体系,建立鉴别检测PRV野毒株的普通PCR方法,并验证其特异性、敏感性、重复性、稳定性以及对临床样品的检测效果。结果表明：PCR体系的最优水平组合为Taq Mix 8μL,g B、g E引物的终浓度分别为0.2μmol/L和0.2μmol/L。建立的普通PCR检测体系仅对PRV野毒株呈双阳性,对疫苗株g B基因呈单阳性,检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪乙型脑炎病毒、大肠杆菌等均显示阴性;敏感度介于1×103~1×104TCID50/m L病毒效价之间;重复性与稳定性良好;检测20份广东地区猪场临床疑似样品,疫苗毒株阳性率为25%,野毒株阳性率为10%,g B、g E单项PCR检测的符合率为100%。说明试验优化建立的普通PCR方法能对PRV野毒株进行快速鉴别诊断。

关 键 词：猪伪狂犬病毒 野毒株 正交试验 PCR 快速检测 鉴定 

分 类 号：S852.659.1[农业科学—基础兽医学]