布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达及功能分析  

Prokaryotic expression and functional analysis of Brucella Ⅳ secretion system protein BMEI0742 gene

作　　者：豆晓霞[1] 刘洋[1] 李敏[1] 荆明龙 李明奇[1] 王小凤 陈创夫[1] 张辉[1] 

机构地区：[1]石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆石河子832000

出　　处：《江苏农业科学》2018年第12期33-38,共6页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家国际科技合作专项(编号:2015DFR31110)

摘　　要：为构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达载体,并进行表达、鉴定。从羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)16M株的基因组中克隆BMEI0742基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0742利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,对该蛋白功能进行生物信息学分析。成功构建了pET-28a-BMEI0742原核表达载体,SDS-PAGE检测结果显示,重组蛋白的分子量约是50 ku,BMEI0742蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主并利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型。本研究成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因,并成功获得了BMEI0742蛋白,该蛋白具有与布鲁氏菌自身蛋白相同的抗原性,为布鲁氏菌翻译延伸因子Tu,为进一步研究其免疫性和保护性以及在布鲁氏菌的致病机制奠定基础。

关 键 词：布鲁氏菌 BMEI0742基因 鉴定 原核表达 反应原性 

分 类 号：S855.99[农业科学—临床兽医学]