水稻幼苗酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定  

Construction and identification of yeast two hybrid cDNA library from rice seedling

作　　者：朱佳慧 徐秋芳[2] 袁平平 倪海平[2] 周益军[2] 蒋选利[3] 杜何为[1] 

机构地区：[1]长江大学生命科学学院,湖北荆州434025 [2]江苏省农业科学院植物保护研究所,江苏南京210014 [3]贵州大学农学院,贵州贵阳550025

出　　处：《江苏农业科学》2018年第9期47-50,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31471768);江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(15)1053]

摘　　要：为解析水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)与寄主水稻的互作机制,筛选水稻中与病毒互作的蛋白,以易感RBSDV的水稻品种日本晴3~4叶期的组织样品为材料,通过提取总RNA后分离获得m RNA,合成cDNA双链后连入pDONR222载体,获得初级文库。初级文库的滴度为6.6×10~6CFU/mL,库容为1.9×10~7CFU,重组率>95%,插入片段平均长度>1 kb。提取初级文库质粒,通过重组反应将水稻cDNA文库转移至pGADT7-DEST载体,构建获得水稻幼苗的酵母双杂交cDNA文库,文库的滴度为4.5×10~6CFU/mL,库容为1.3×10~7CFU,重组率>95%,cDNA插入片段平均长度>1 kb。采用RBSDV候选基因进行文库筛选,结果表明所构建的酵母文库可用于筛选病毒互作蛋白。

关 键 词：水稻 幼苗cDNA文库 酵母双杂交 水稻黑条矮缩病毒 滴度 库容 重组率 

分 类 号：S435.111.49[农业科学—农业昆虫与害虫防治] Q943.2[农业科学—植物保护]