一种简单有效的检测异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶(AceK)活性的方法  

A simple and effective method to measure isocitrate dehydrogenase kinase/phosphatase(AceK)activities

作　　者：尹燕霞[1] 李姗泽 高雅丹 姜国华 魏群[1] YIN Yanxia;LI Shanze;GAO Yadan;JIANG Guohua;WEI Qun(College of Life Sciences,Beijing Key Laboratory of Genetic Engineering Drugs and Bioteehnology,Beijing Normal University,100875,Beijing,China)

机构地区：[1]北京师范大学生命科学学院北京市基因工程药物及生物技术重点实验室,北京100875

出　　处：《北京师范大学学报（自然科学版）》2018年第5期622-627,共6页Journal of Beijing Normal University(Natural Science)

基　　金：国家自然科学青年基金资助项目(31700695);国家自然科学基金重点资助项目(2113303)

摘　　要：对连续法间接测定异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶(AceK)活性方法进行改造和优化,摸索了底物用量、酶用量、反应时间等条件,建立了测定AceK活性的简便方法——终止法.实验表明:AceK活性需要金属离子Mg^(2+),其在反应体系中的浓度是2mmol·L^(-1);在激酶活性测定的实验体系中,反应时间和底物浓度分别为15min和3μmol·L^(-1).在磷酸酶活性测定的标准实验体系中,反应时间和底物浓度分别为15min和5μmol·L^(-1);对于激酶活性和磷酸酶活性,反应体系中AceK的最佳酶浓度都为1.0μmol·L^(-1);该方法在120min内稳定性较好.终止法测定的AceK激酶或磷酸酶的活性与同位素法测定的激酶或磷酸酶活性结果是一致的.Effects of metal ions,substrate dose,enzyme dose and reaction time on the activity of isocitrate dehydrogenase kinase/phosphatase（AceK）were investigated.2 mmol·L^-1 Mg^2＋ in assay buffer was found to be required,the reaction time and substrate concentration were set at 15 min and 3μmol·L^-1 respectively.In standard experimental system for the determination of phosphatase activity,reaction time and substrate concentration were 15 min and 5μmol·L^-1 respectively.For kinase activity and phosphatase activity,optimal AceK concentration was 1μmol·L^-1.This method had good stability in 120 min.Activities of AceK kinase or phosphatase determined by this method were consistent with those determined by isotope method.

关 键 词：异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶 激酶活性 磷酸酶活性 异柠檬酸脱氢酶 终止法 

分 类 号：Q554[生物学—生物化学]