散寒活血祛白方及其拆方通过TLRs信号转导通路影响氧化压力下黑素细胞损伤的研究  

作　　者：欧柏生[1] 李雨晴 邓玉霞 黄敏敏 

机构地区：[1]广西中医药大学第一附属医院,广西南宁530023 [2]广西中医药大学,广西南宁530001

出　　处：《时珍国医国药》2018年第9期2124-2130,共7页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(81460732);广西自然科学基金(2014GXNSFAA118141)

摘　　要：目的观察散寒活血祛白方及其拆方通过TLRs信号转导通路影响氧化压力下黑素细胞损伤,探讨其抗氧化损伤的保护机制。方法以500 nmol/ml过氧化氢(H_2O_2)诱导PIG1,A375细胞处于氧化应激状态,建立细胞氧化损伤模型。实验分组为细胞组、H_2O_2模型组、散寒活血祛白方全方组、散寒活血祛白方拆方组(即养血活血组、散寒温阳组、补益肝肾组)、白癜风胶囊组,各给药组加入相应药物培养,其中A375细胞给药终浓度为32 mg/ml,PIG1细胞给药终浓度为4mg/ml。除细胞组外,其余组均加入500 nmol/ml过氧化氢。CCK8检测细胞活性,RT-PCR检测TLR3,TLR9,Keratin14,ASO2及细胞趋化因子CCL2,CCL3,CCL5的基因表达,Western blot检测TLRs信号通路的表达变化,ELISA检测胞内IL6,IL8,CCL2,CCL3,CCL5蛋白的表达,流式检测胞内活性氧簇(ROS)含量,Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡水平,共聚焦荧光显微镜检测细胞NF-κB活性。结果散寒活血祛白方及其拆方能显著提高H_2O_2诱导的PIG1及A375细胞的活性;散寒活血祛白方显著抑制H_2O_2诱导的黑素细胞ASO2,CCL2,CCL3,CCL5,TLR3,TLR9表达的升高,pP65,p-IκB,TLR3和TLR9蛋白表达的升高,以及保护Keratin14表达的降低;散寒活血祛白方明显下调H_2O_2诱导的IL6,CCL2,CCL3,CCL5表达及ROS浓度;并促进黑色素生成,抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡,抑制NF-IκB活性。结论散寒活血祛白方及其拆方通过抑制TLRs信号通路抑制NF-κB活性从而参与调控信号因子IL6等的表达,抑制CCL2,CCL3,CCL5的分泌,抑制氧化压力下A375细胞和PIG1细胞的炎症反应,进而促进细胞存活和黑色素生成,抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡。

关 键 词：白癜风 过氧化氢 黑素细胞 氧化应激 TOLL样受体 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]