半合成人肿瘤坏死因子cDNA的构建及其在大肠杆菌中的高表达  

作　　者：李昌本[1] 柴常星[1] 谢毅[1] 吕群 柴建华[1] 喻红 陈春妹 林丽珠[1] 王启松[1] 李宗林[1] 周娅[1] 李育阳[1] 赵寿元[1] 

机构地区：[1]遗传工程国家重点实验室复旦大学遗传学研究所,上海200433

出　　处：《中国科学（B辑）》1991年第5期497-504,共8页Science in China(Series B)

摘　　要：本文报道从人基因文库中分离淋巴毒素(LT)基因的同时,克隆了肿瘤坏死因子(TNF)基因,这两个基因相距1.2kb.TNF基因有4个外显子,第4外显子编码TNF成熟蛋白157个氨基酸中的140个.将第4外显子切出一部分,再人工合成编码其余氨基酸的DNA片段,两者连接构成重组的人TNF(rhTNF)cDNA,并克隆在大肠杆菌表达载体中成功地得到表达.5 l罐发酵得菌体约20g/l,以L929为靶细胞测定细胞毒活性为10~6-10~7单位/ml.高压液相色谱仪分离纯化rhTNF,冻干后得白色粉剂.测定了这种rhTNF的氨基端的10个氨基酸序列,证明与天然的人TNF完全相同.纯度约为95％.

关 键 词：半合成 人 肿瘤球死因子 CDNA 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]