猪肺炎支原体脂蛋白LppT的多克隆抗体制备及鉴定  

作　　者：刘威[1] 袁芳艳[1] 周丹娜[1] 刘泽文[1] 杨克礼[1] 段正赢[1] 郭锐[1] 蔡行[1] 肖少波 田永祥[1] 

机构地区：[1]湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室,湖北武汉430064 [2]华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430064

出　　处：《江苏农业科学》2017年第19期220-223,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家重点研发计划(编号:2016YFD0500906);国家自然科学基金(编号:31502069;31170160);湖北省农业科学院青年科学基金(编号:2015NKYJJ14);湖北省农业科学院竞争性计划项目(编号:2016jzxjh030);湖北省农业科技创新中心资助项目(编号:2015-620-004-001)

摘　　要：试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT,通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1 860、2 547 bp处的A突变为G,使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行了蛋白纯化,纯化的目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫新西兰大白兔制备LppT蛋白多克隆抗体。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得1条特异性蛋白条带,分子质量约为110 ku,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以可溶形式表达于上清中,纯化的蛋白经SDS-PAGE分离后,用制备的LppT多克隆抗体进行Western Blot检测,结果表明制备的LppT多克隆抗体具有较强的特异性。

关 键 词：猪肺炎支原体 脂蛋白 LppT 多克隆抗体 

分 类 号：S858.28[农业科学—临床兽医学]