珍稀濒危植物银缕梅ISSR-PCR反应体系建立及优化  

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Rare and Endangered Plant Parrotia subaequalis

作　　者：陈云霞[1] 路志远 肖卓恒 CHEN Yun-xia;LU Zhi-yuan;XIAO Zhuo-heng(Nanjing Forest Police College,Nanjing,Jiangsu 210023)

机构地区：[1]南京森林警察学院,江苏南京210023

出　　处：《安徽农业科学》2018年第11期81-83,共3页Journal of Anhui Agricultural Sciences

基　　金：国家级大学生创新训练项目(201612213012)

摘　　要：[目的]建立和优化银缕梅ISSR-PCR反应体系。[方法]采用正交试验和单因子试验对影响PCR扩增体系中的Mg^(2+)浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶用量5个因子进行分析研究。[结果]银缕梅ISSR-PCR 25μL反应体系中5个因子最优水平:DNA模板(20 ng/μL)2.50μL,引物(10μmol/L)1.00μL,Taq酶(5 U/μL)0.10μL,Mg^(2+)(25 mmol/L)3.00μL,d NTPs(2.5 mmol/L)1.50μL。[结论]银缕梅ISSR-PCR反应最优体系的建立为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子指纹图谱构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础。[Objective]To establish and optimize ISSR-PCR reaction system.[Method]Effect for ISSR-PCR reaction of Parrotia subaequalis on 5 factors(Mg 2+,dNTPs,DNA template,Taq polymerase and primer)were analyzed by orthogonal design and single factor test.[Result]The optimal ISSR-PCR reaction system(25μL)mixture contained DNA template(20 ng/μL)2.50μL,primer(10μmol/L)1.00μL,Taq polymerase(5 U/μL)0.10μL,Mg 2+(25 mmol/L)3.00μL,dNTPs(2.5 mmol/L)1.50μL.[Conclusion]The establishment of ISSR-PCR reaction system for P.subaequalis laid the foundation for the further use of ISSR to study molecular marker-assisted breeding,molecular identity and genetic diversity.

关 键 词：银缕梅 ISSR PCR反应体系 资源保护 

分 类 号：S188[农业科学—农业基础科学]