加工番茄PVY^(N:O) HC-Pro、STV RdRp酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活验证  

Construction and identification of bait vector containing PVY^(N:O) HC-Pro、STV RdRp gene in yeast two-hybrid system of processing tomatoes

作　　者：路遥[1] 周东[1] 郑银英[1] 

机构地区：[1]石河子大学生命科学学院/石河子大学农业生物技术重点实验室,新疆石河子832003

出　　处：《江苏农业科学》2018年第17期49-52,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31460466)

摘　　要：马铃薯Y病毒(potato virus Y,简称PVY)和南方番茄病毒(southern tomato virus,简称STV)是加工番茄上非常普遍的病毒,以从加工番茄c DNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标,构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体,为抗病基因的筛选工作奠定基础。通过PCR技术,扩增PVY HC-Pro、STV RdRp片段分别克隆到诱饵载体p Sos,用酶切、测序结果正确的2个诱饵载体重组质粒转化酵母感受态cdc25H,进行自激活检测及毒性验证。将不同组合的酵母转化液涂布于SD/Glu(-UL)培养基(SD/Glu指含有葡萄糖的SD培养基,-UL指缺失尿嘧啶、亮氨酸2种氨基酸)平板上,于25℃培养4 d后,挑取3个单菌落分别划线于2个SD/Glu(-UL)和2个SD/Gal(-UL)培养基上,并分别置于25、37℃继续培养5 d。结果表明,在25℃培养条件下,SD/Glu(-UL)和SD/Gal(-UL)培养基上酵母菌生长正常;在37℃培养条件下,SD/Glu(-UL)培养基上无酵母菌的生长,SD/Gal(-UL)培养基上阳性组合酵母生长正常,阴性组合酵母均不生长。构建的p Sos-HC-Pro、p Sos-RdRp诱饵载体没有转录自激活活性和毒害作用,可用于Cyto Trap酵母双杂交系统。

关 键 词：加工番茄 PVY STV 酵母双杂交 自激活 诱饵载体 

分 类 号：S641.201[农业科学—蔬菜学]