蓝杆藻ATCC 51142中α-酮戊二酸脱羧酶的克隆与表达  

Cloning and expression of α-ketoglutarate decarboxylase from Cyanothece sp. ATCC 51142

作　　者：谢琮琮 许文武 李至敏[2] 王小琴[1] 雷国风 张伟 黄婷 李志敏[1] 

机构地区：[1]江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045 [2]江西农业大学理学院,江西南昌330045

出　　处：《江苏农业科学》2018年第19期37-39,共3页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31560250;31400054);江西省自然科学基金重大项目(编号:20161ACB21012);江西省教育厅科技研究重点项目(编号:GJJ160353);江西农业大学国家级大学生创新创业训练项目(编号:201710410005)

摘　　要：α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。为了证实cce4227基因编码蛋白的催化功能,从蓝杆藻ATCC 51142基因组中克隆cce4227基因,然后构建pET28a-cce4227表达质粒。将该质粒与p Tf16分子伴侣质粒共转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞后进行重组蛋白的诱导表达。利用镍亲和层析方法对cce4227蛋白进行分离纯化,得到纯度> 95%的cce4227蛋白,菌体蛋白收率约为12 mg/g。酶动力学测试表明,cce4227蛋白是1个焦磷酸硫胺素(TPP)依赖型的α-酮戊二酸脱羧酶。

关 键 词：蓝杆藻ATCC51142 α-酮戊二酸脱羧酶 基因克隆 重组表达 蛋白质纯化 

分 类 号：S188[农业科学—农业基础科学]