虾肝肠胞虫实时荧光RAA快速检测方法的建立  

作　　者：黄纪徽[1] 吴山楠 王丹云[1] 张亮亮[1] 陈平亚 程奇 张建勋 

机构地区：[1]海南出入境检验检疫局,海口570311 [2]杭州众测生物科技有限公司,杭州310000

出　　处：《养殖与饲料》2018年第11期13-16,共4页Animals Breeding and Feed

基　　金：海南省重点研发项目(ZDYF2017063);海南省自然科学基金项目(317292);海南出入境检验检疫局科研项目(HICIQKJ201701)

摘　　要：为了早期快速诊断近些年流行于国内的虾肝肠胞虫,根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫EHP-SSU rDNA序列比对分析,在SSU基因内确定了一段156 bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物和探针,经过优化重组酶介导的核酸技术(Recombinase-aid-amplification,RAA)反应条件,建立快速检测虾肝肠胞虫的RAA恒温荧光检测方法。在RAA进行到24个循环反应时可以检测到的质粒最小浓度是10 copies/μL,相当于10个病毒粒子。利用该方法,从天然感染EHP的虾肝胰腺组织DNA中可以检测出片段,而健康的虾和感染了传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)和虾虹彩病毒(SIV)的组织则没有扩增条带。试验表明,本研究建立的RAA恒温荧光检测方法具有快速、成本低、特异性好、准确性高的特点,为大范围早期病害的快速检测提供了新方法。

关 键 词：虾肝肠胞虫 RAA检测 SSU-rDNA序列 

分 类 号：S945.4[农业科学—水产养殖]