一步法逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA)技术检测菜豆荚斑驳病毒  

One-step reverse transcription recombinase polymerase amplification(RT-RPA) technology for detection of BPMV

作　　者：张永江[1] 魏霜[2] 袁俊杰 乾义柯 李桂芬[1] 魏梅生[1] 

机构地区：[1]中国检验检疫科学研究院,北京100176 [2]广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州510632 [3]湛江出入境检验检疫局,广东湛江524000 [4]伊犁出入境检验检疫局,新疆伊宁835221

出　　处：《江苏农业科学》2018年第21期96-98,共3页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家重点研发计划(编号:2016YFF0203200);广东出入境检验检疫局科技计划(编号:2017GDK76)

摘　　要：菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus,简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物,建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测。根据BPMV基因组的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,简称RPA)技术特异性引物,对BPMV、南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,简称SBMV)、大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,简称SMV)、南芥菜花叶病毒(arabis mosaic virus,简称Ar MV)及烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,简称TRSV)共5种病毒进行RT-RPA特异性验证;并设计5个模板浓度梯度,以验证RT-RPA方法的灵敏性。结果表明,建立的RT-RPA检测方法能够从BPMV样品中检测到198 bp的特异性条带,且仅需在40℃下恒温反应40 min,不需要特殊的仪器设备;特异性验证试验表明,除BPMV能检测到特异性条带外,其他4种病毒SBMV、SMV、Ar MV、TRSV均未检测到特异性条带,证明该方法特异性好; RT-RPA检测BPMV的灵敏度达到10-4稀释度,说明所建立的RT-RPA方法灵敏性高。综上所述,建立的RT-RPA方法检测BPMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。

关 键 词：菜豆荚斑驳病毒 RT-RPA检测 植物检疫 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]