岩陀ITS2片段PCR扩增条件优化及物种鉴别研究  

作　　者：方强强 王燕 

机构地区：[1]大理大学药学与化学学院,云南大理671000

出　　处：《现代园艺》2019年第5期31-34,共4页contemporary horticulture

基　　金：国家自然科学基金(81560695);大理大学博士启动基金(KYBS201512);大理大学第八批中青年学术带头人培养基金

摘　　要：以岩陀植物叶片为材料,利用试剂盒提取方法提取植物叶片中的DNA,对ITS2序列进行PCR扩增条件优化并对ITS2序列鉴别物种能力进行考察;通过单因素实验分别研究退火温度、DNA模板量、循环次数等因素对岩陀DNA条形码鉴别中所选的ITS2序列扩增反应的影响,并对扩增体系进行优化,采用Seqman7.1软件对测序峰图进行校对拼接,应用MEGA计算种内种间遗传距离,采用邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统发育树;结果表明:优化后的PCR扩增反应体系总体积为25μL,含TaqPCR Master Mix 12.5μL、DNA模板量5ng、上下游引物(10mol/L)各1μL、dd H2O 9.5μL,ITS2序列在退火温度设置为60℃,循环次数为30次的条件下进行PCR扩增,获得清晰单一的电泳条带,ITS2测序成功率100%,比对后的序列长度475bp,GC含量约50%,种内种间变异存在重叠,没有明显的Barcoding gap;结论:通过试剂盒提取岩陀植物叶片DNA,在优化后的PCR扩增反应体系对ITS2序列进行扩增,可以满足后续对鬼灯檠属多基原植物岩陀的亲缘关系、物种鉴别和遗传多样性等领域的研究,但ITS2序列不适合岩陀种DNA条形码鉴别。

关 键 词：岩陀 DNA提取 核糖体ITS2 PCR扩增条件 测序 分子鉴别 

分 类 号：S567.239[农业科学—中草药栽培]