微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达  

Construction and expression of mini human insulin vector in peanuts

作　　者：仵陶[1] 安胜军[2] 邵铁梅[1] 朱正歌[3] 焦展[1] 刘培[1] 李雪[1] Wu Tao

机构地区：[1]河北化工医药职业技术学院/河北省高校生物反应器与蛋白类药物应用技术研发中心,河北石家庄050026 [2]河北中医学院科研中心,河北石家庄050091 [3]河北师范大学生命科学学院,河北石家庄050024

出　　处：《江苏农业科学》2019年第4期42-46,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：河北省高等学校科学技术研究重点项目(编号:ZD2014087);河北省高等学校科学技术研究重点项目(编号:ZH2012081)

摘　　要：制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株,从而利用转基因花生表达微型人胰岛素。首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因(mini insulin,MI),其中胰岛素B链通过丙-丙-赖三肽和A链相连接,在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG。质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中,抗生素筛选得到转基因花生苗,之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定。结果显示,试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术,并且得到了转基因花生苗;分子生物学技术鉴定结果显示,微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中,且在花生叶片中表达,其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27%。目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法,为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础。

关 键 词：分子医药农业 转基因花生 微型人胰岛素 载体构建 基因表达 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]