牛支原体P33蛋白的原核表达及鉴定  

作　　者：李令臣 吴胜昔 梁望旺[2] 李俊萱 曾政[2] 黄恒[2] 

机构地区：[1]重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054 [2]重庆市动物疫病预防控制中心,重庆401120

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2019年第7期81-84,共4页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：重庆市社会民生科技创新专项(cstc2015shmszx80027; cstc2016shmszx0076);重庆市巴南区科技计划项目(2017TJ06)

摘　　要：为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列(登录号为AIA33909.1)设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)/P33,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行原核表达,再利用His-tag镍柱纯化P33重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:成功扩增得到牛支原体P33基因,其核苷酸序列长度为710 bp,重组菌株在温度为30℃、以0.5 mmol/L IPTG诱导12小时时,P33蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后P33蛋白在33 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中表达牛支原体P33重组蛋白。

关 键 词：牛支原体 P33 蛋白 载体构建 原核表达 重组菌株 蛋白免疫印迹分析 

分 类 号：S852.62[农业科学—基础兽医学] Q786[农业科学—兽医学]