端粒酶基因转染猪气管黏膜上皮细胞增殖特性的研究  

作　　者：汤智慧[1] 王津津[2] 郭抗抗[3] 

机构地区：[1]汉中职业技术学院,陕西汉中723000 [2]深圳出入境检验检疫局,广东深圳518045 [3]西北农林科技大学,陕西杨凌712100

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2019年第11期92-96,182,共6页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：陕西省重大科技攻关项目(2006kz07-G2)

摘　　要：为了研究外源性端粒酶(hTERT)基因导入后对原代培养猪气管黏膜上皮细胞(STECs)增殖活性的影响,试验将外源性hTERT基因转染至原代分离培养的STECs中,以脂质体法用重组质粒pCI-neo-hTERT转染STECs;通过倒置显微镜观察细胞形态,间接免疫荧光法鉴定8型角蛋白的上皮源性;用PCR和Western-blot法检测转染后STECs中hTERT基因的表达情况;用MTT法和流式细胞仪分别检测转染细胞的活力和增殖周期。结果表明:脂质体和质粒体积比会影响转染效率,当二者比例为1∶3时,转染效率最佳;转染细胞经PCR扩增得到大小为461bp的片段,Western-blot检测得到大小为125 ku的条带;转染后的细胞仍然符合上皮源性细胞的生长特点;细胞活力曲线显示,在接种后的第3~5天细胞增殖速度最快;细胞周期测定显示,转染细胞的细胞核型为2倍体,S期细胞达到48.35%。说明原代培养的STECs转染外源性hTERT基因后,细胞增殖活性增高,并保持了基本的细胞生物学特征,有进一步建立稳定传代细胞系的可能。

关 键 词：猪气管黏膜上皮细胞 原代培养 HTERT 转染 增殖特性 上皮源性 

分 类 号：Q75[生物学—分子生物学]