猪肺炎支原体纤毛黏附因子P97和F7-CTB对O型口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用  

Immune enhancement effect of Mycoplasma hyopneumoniae cilia adhesion factor P97 and F7-CTB on O-type foot-and-mouth disease inactivated vaccine

作　　者：郭芸芸 张雪寒[2] 刘茂军[2] 王警 牛家强 何孔旺[2] Guo Yunyun

机构地区：[1]西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝860000 [2]江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014

出　　处：《江苏农业科学》2019年第11期204-210,共7页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：“十二五”国家科技支撑计划(编号:2015BAD12B04);国家自然科学基金(编号:31572503)

摘　　要：旨在研究猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,简称Mhp)纤毛黏附因子P97以及F7鞭毛蛋白(flagellin,简称F)-霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit,简称CTB)2种重组蛋白对口蹄疫(foot-and-mouth disease,简称FMD)灭活疫苗的免疫增强作用。通过体外表达获得pCold-F7-CTB、pET32a-P97-R12种重组蛋白,用间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)方法检测pCold-F7-CTB蛋白的生物学活性,将重组蛋白分别与口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,简称FMDV)灭活抗原、口蹄疫灭活疫苗混合制备,皮下或腹腔接种Balb/c小鼠,共免疫2次,间隔3周。分别于免疫前、免疫后21、35、49d采血,49d后无菌摘取脾脏。采用阻断ELISA的方法检测小鼠血清口蹄疫O型病毒免疫球蛋白(IgG)抗体滴度,用流式细胞术检测脾淋巴细胞亚型比例,以评估免疫效力。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析结果表明,2种重组蛋白成功表达。用GMl(神经节苷脂)-ELISA方法验证pCold-F7-CTB的生物学活性,发现融合蛋白F7-CTB保留了与GMl的结合能力。小鼠免疫试验结果表明,经皮下注射接种后,单独口蹄疫病毒灭活抗原组没有产生明显的抗体水平,而F7-CTB免疫增强剂组比单独口蹄疫病毒灭活抗原组的IgG滴度更高。在试验中发现,当重组蛋白与口蹄疫灭活疫苗联合使用时,血清中的IgG滴度明显增高,CD3^+CD8^+T淋巴细胞比值上升;P97和F7-CTB混合使用对口蹄疫灭活疫苗的免疫增强效果最佳。可以初步得出,免疫增强剂P97和F7-CTB具有协同作用,皮下注射可显著提高FMD的特异性IgG水平,CD3^+CD8^+T淋巴细胞比值升高,显示其具有良好的应用前景。

关 键 词：口蹄疫 P97 F7-CTB 免疫增强剂 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]