耳蜗移植神经干细胞的培养和鉴定  

作　　者：吴佳源 刘俊[2] 

机构地区：[1]浙江省东阳市人民医院,东阳322100 [2]浙江省中医院

出　　处：《听力学及言语疾病杂志》2019年第4期405-409,共5页Journal of Audiology and Speech Pathology

基　　金：浙江省教育厅(Z201119721);浙江省卫生厅(200913120)课题

摘　　要：目的 以SD孕鼠的胎鼠海马组织为原材料来分离培养神经干细胞,为后续干细胞移植实验奠定基础。方法 分离3只孕14~15天的SD大鼠胚胎海马组织,用无血清培养技术悬浮培养神经干细胞,测量神经干细胞球的数量和直径。用免疫组化荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;掺入5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu),并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况。采用荧光染料Hoechest33342标记神经干细胞,然后用10%胎牛血清诱导其分化,用免疫组化荧光技术鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、星状胶质细胞特异性表达的胞浆蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞的特异性抗原2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP),以确定培养细胞为神经干细胞。结果 用大鼠胚胎海马组织可以成功分离神经干细胞,并可以在体外培养下稳定增殖传代,培养的神经干细胞及经胎牛血清诱导分化后的神经干细胞,经免疫组化荧光技术鉴定后可成功表达特异性标志物Nestin、NSE、GFAP、CNP。结论 以SD胎鼠海马组织为原材料分离培养的神经干细胞具有自我更新能力,并能分化成神经元、星状胶质细胞及少突胶质细胞,获取的细胞可用于干细胞移植。

关 键 词：SD大鼠 神经干细胞 悬浮培养 鉴定 

分 类 号：R764.35[医药卫生—耳鼻咽喉科]