桑树SSR-PCR反应体系的优化  

Optimization of SSR-PCR reaction system for mulberry

作　　者：刘玲 陈祥平[1] 范小敏[1] 傅晓 柯皓天 吕银 Liu Ling

机构地区：[1]四川省丝绸科学研究院,四川成都610031 [2]四川省丝绸工程技术研究中心,四川成都610031

出　　处：《江苏农业科学》2019年第14期45-49,58,共6页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：四川省科技计划(编号:2017JY0277);四川省科技创新产业链项目(编号:2016NZ0004)

摘　　要：为了建立经济稳定的桑树简单重复序列(SSR)-PCR反应体系,为SSR分子标记在桑树研究中更广泛地应用提供试验基础,采用L16(4^5)正交试验设计和单因素试验,对桑树SSR-PCR反应体系中的模板DNA浓度、引物浓度、Mg^2+浓度、dNTPs浓度和rTaq酶用量5个因素的4个水平进行优化分析,并比较这5个因素的不同浓度对扩增效果的影响.结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为Mg^2+、dNTPs>引物>模板DNA>rTaq酶.研究最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含有1.5μL10~20ng/μLDNA模板、0.4μL25mmol/LMg^2+、0.5μL2mmol/LdNTPs、各0.15μL20μmol/L正反向引物、0.1μL5U/μLrTaq酶和1μL10×loadingbuffer.通过稳定性检测,表明该体系能够用于桑树的SSR分析.

关 键 词：桑树 正交试验设计 单因素试验 SSR-PCR反应体系优化 

分 类 号：S888.2[农业科学—特种经济动物饲养]