日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定  

作　　者：耿超[1] 赵红梅[1] 周丹娜[2] 蔡行[1] 王双双 

机构地区：[1]长江大学动物科学学院,湖北荆州434025 [2]湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,武汉430064

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2019年第15期98-100,共3页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

摘　　要：为了探究日本乙型脑炎病毒( Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机理和研制以 JEV 复制复合体为靶标的药物,试验以 GenBank 中收录的 JEV HW1 株基因序列为模板,设计针对 NS5rdrp 的特异性引物,提取 JEV RNA,反转录得到 cDNA,以其为模板使用 PCR方法克隆得到 NS5rdrp 基因片段;利用 T4DNA 连接酶构建重组质粒 pcDNA3. 1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent 转染 BHK21 细胞,转染 24 h 后观察结果;最后利用 Western-blot 技术检测 NS5rarp 蛋白的表达情况。结果表明: PCR扩增得到大小约为920 bp的 NS5rdrp 基因片段;测序结果经 NCBI 上 BLAST 比对分析,克隆得到的 NS5rdrp 基因与 HW1 株的同源性为 100%;转染时细胞的最佳密度区间为 70%~ 80%,转染试剂与转染质粒的比例为 3 ∶ 1;经过Western-blot 检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp 蛋白的分子质量约为 37 ku。说明试验通过真核表达成功获得 NS5rdrp 蛋白。

关 键 词：日本乙型脑炎病毒 NS5rdrp 蛋白 真核表达 聚合酶链式反应 BHK21 细胞 免疫印迹分析 

分 类 号：S852.659.6[农业科学—基础兽医学] Q51[农业科学—兽医学]