含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素基因的重组大肠杆菌的高密度发酵和免疫效果  

High-density fermentation and immune effect of recombinant Escherichia coli containing Clostridium putrificum α toxin and Clostridium perfringens ε toxin genes

作　　者：彭小兵[1] 杜吉革 彭国瑞[1] 李旭妮[1] 董令赢 冯丽芳 蒋玉文[1] Peng Xiaobing

机构地区：[1]中国兽医药品监察所,北京100081 [2]北京中海生物科技有限公司,北京100081

出　　处：《江苏农业科学》2019年第17期186-189,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家重点研发计划(编号:2017YFD0500905);中国兽医药品监察所所级课题(编号:201701)

摘　　要：为确定含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白的生产效率并评价其作为抗原的免疫效果,用生物反应器对重组大肠杆菌DE3-pET-AE进行高密度发酵,并将其制苗后以不同抗原剂量分别接种家兔和绵羊,间隔21d进行二免,分别测定一免、二免动物混合血清的中和效价。发酵结果显示,培养物菌体密度D600nm达20.3,相对表达量为27.6%,D600nm与相对表达量的乘积为摇瓶培养的6.5倍,菌体湿质量为37.2g/L;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,目的蛋白以可溶形式表达。动物免疫效果评价结果显示,在家兔和绵羊上,抗原含量与免疫效果在一定的范围内均呈正相关,当接种量为300μg/只时,免疫效果均最好;对腐败梭菌毒素与D型产气荚膜梭菌毒素的血清中和效价,在家兔上一免、二免分别达4与30、15与200,在绵羊上一免、二免分别达2与30、12与250。结果表明,DE3-pET-AE菌高密度发酵可获得高产量蛋白抗原,且抗原的免疫效果明显优于《中华人民共和国兽药典》合格标准。

关 键 词：腐败梭菌α毒素 产气荚膜梭菌ε毒素 大肠杆菌高密度发酵 免疫效果 抗原含量 家兔 绵羊 

分 类 号：S852.43[农业科学—基础兽医学]